探讨肝素对脂多糖(LPS)刺激人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分泌单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)水平以及单核细胞与内皮细胞黏附作用的影响。
方法对HUVEC进行体外培养,取第4~5代用于本次实验。将细胞分成磷酸盐缓冲液(PBS)对照组、肝素对照组、LPS组、肝素+ LPS组。LPS组加入10 mg/L的LPS;PBS对照组则加入等量PBS;肝素对照组则加入10 kU/L普通肝素;肝素+ LPS组在进行LPS刺激前15 min加入10 kU/L的普通肝素。各组于LPS刺激后6 h、12 h收集细胞,通过实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)测定细胞中MCP-1 mRNA表达;各组预处理后加入荧光染料标记的人单核细胞株THP-1共同避光孵育1 h,在荧光显微镜下观察THP-1与HUVEC的黏附密度。
结果与PBS对照组相比,LPS刺激后6 h和12 h细胞MCP-1 mRNA表达明显增加,6 h达到高峰,然后逐渐降低,但12 h仍明显高于PBS对照组〔2-ΔΔCt:6 h为16.41(15.03,18.00)比1.00(0.80,1.26),12 h为9.27(8.11,9.85)比1.00(0.84,1.20),均P<0.05〕。用肝素预处理可使LPS诱导的MCP-1 mRNA表达明显降低〔2-ΔΔCt:6 h为2.06(1.72,2.46)比16.41(15.03,18.00),12 h为2.46(2.19,4.56)比9.27(8.11,9.85),均P<0.05〕。肝素对照组MCP-1 mRNA表达与PBS对照组相比差异无统计学意义〔2-ΔΔCt:6 h为1.47(1.29,1.65)比1.00(0.80,1.26),12 h为2.69(2.58,2.77)比1.00(0.84,1.20),均P>0.05〕。荧光显微镜下观察显示,LPS刺激可促进THP-1与HUVEC的黏附;肝素预处理可抑制LPS刺激的THP-1与HUVEC黏附。
结论肝素预处理可以抑制MCP-1的表达,从而减少THP-1与HUVEC的黏附,在脓毒症中发挥保护作用。