【摘 要】
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目的 利用二聚体蝎型荧光探针技术,建立一种敏感特异、快速价廉且能广泛应用的结核分枝杆菌DNA荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测方法.方法 构建重组质粒pMD18-T-senX3-regX3 IR
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目的 利用二聚体蝎型荧光探针技术,建立一种敏感特异、快速价廉且能广泛应用的结核分枝杆菌DNA荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测方法.方法 构建重组质粒pMD18-T-senX3-regX3 IR作为标准品,自行设计二聚体蝎型探针,优化定量PCR体系,并进行方法学评价及初步临床应用.结果 (1)成功构建了重组质粒pMD18-T-senX3-regX3 IR.(2)建立了利用二聚体蝎型荧光探针的荧光定量PCR方法,其线性范围:101～107拷贝/μl;灵敏度:101拷贝/μl;重复性:批内变异系数(CV)为2.35%,批间CV为3.17%,日间CV为4.06%;特异性100%;(3)初步临床应用证明:该方法比商品化Taqman方法阳性检出率更高,检测时间更短和成本也明显降低.结论 本研究首次建立了以二聚体蝎型荧光探针技术为平台的结核分枝杆菌荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)方法,这为应用二聚体蝎型荧光探针技术开辟检测结核分枝杆菌的分子诊断新途径奠定了一定的基础.
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