【摘 要】
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目的 制备白细胞介素2(IL-2)锚定的肿瘤细胞来源的exosomes疫苗,探讨其体外诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的抗肿瘤效应.方法 构建含糖基化磷脂酰肌醇(GPI)信号肽序列与人IL-2的
【机 构】
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重庆医科大学附属永川医院泌尿外科,重庆医科大学附属第一医院泌尿科,重庆医科大学检验系
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目的 制备白细胞介素2(IL-2)锚定的肿瘤细胞来源的exosomes疫苗,探讨其体外诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的抗肿瘤效应.方法 构建含糖基化磷脂酰肌醇(GPI)信号肽序列与人IL-2的融合基因的pEGFP-N1-IL2gpi质粒,建立稳定表达GPI-IL-2的T24细胞系(T24/GPI-IL-2).采用超速和蔗糖梯度密度离心法提取Ex/GPI-IL-2(即T24/GPI-IL-2细胞培养液中提取的exosomes),并对其进行形态学观察和分子标志检测.通过混合淋巴细胞实验和细胞毒实验,观察Ex/GPI-IL-2对T细胞的增殖和诱导杀伤效应.结果 成功构建重组质粒pEGFP-N1-IL2gpi,建立了稳定表达GPI-IL-2蛋白的细胞系.Ex/GPI-IL-2为直径约30～90nm的类圆碟形小囊泡,表达细胞间黏附分子1(ICAM-1)、热休克蛋白70(HSP70)、MAGE-1和GPI-IL-2等免疫相关蛋白.Ex/GPI-IL-2经过树突状细胞负载后,能更有效地诱导T细胞的增殖和细胞毒效应(P＜0.05).结论 通过基因转染技术,可以将IL-2锚定到肿瘤细胞来源的exosomes上,获得的Ex/GPI-IL-2能够诱导CTL对肿瘤细胞产生更强的诱导杀伤效应,为以exosomes为基础的肿瘤免疫治疗提供了新的途径.
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