【摘 要】
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目的: 构建人骨髓瘤细胞株HMy2 cDNA表达文库. 方法: 提取HMy2细胞总RNA,分离mRNA,反转录合成双链cDNA,消平cDNA末端,连接EcoRⅠ适配子,磷酸化EcoRⅠ适配子5′端,Sephacryl-S
【机 构】
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西安交通大学第二医院,西安交通大学第二医院,第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室
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目的: 构建人骨髓瘤细胞株HMy2 cDNA表达文库. 方法: 提取HMy2细胞总RNA,分离mRNA,反转录合成双链cDNA,消平cDNA末端,连接EcoRⅠ适配子,磷酸化EcoRⅠ适配子5′端,Sephacryl-S400柱除去小于400 bp cDNA片段,与去磷酸化的噬菌体λgt11连接,体外包装后建成cDNA文库. 取出一部分倍比稀释感染 E.coli Y1090,测定文库大小、重组率,并以PCR鉴定cDNA插入片段的大小. 结果: 构建成含1.5×106重组子的人骨髓瘤细胞cDNA文
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