【摘 要】
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目的:利用PCR技术对人β-防御素-3基因进行定点突变,将突变后的基因连接入pGEX-4T-1表达载体.方法:采用PCR体外定点突变技术,设计两对引物,引入一个突变点,通过重叠延伸法进
【机 构】
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兰州大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室
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目的:利用PCR技术对人β-防御素-3基因进行定点突变,将突变后的基因连接入pGEX-4T-1表达载体.方法:采用PCR体外定点突变技术,设计两对引物,引入一个突变点,通过重叠延伸法进行两次PCR扩增,使人β-防御素-3基因第27位密码子由GAG突变为CGA,将突变后的片段克隆入pGEX-4T-1质粒中,转化至E.coli BL21,对鉴定含有目的片段的克隆进行测序.结果:获得预期大小的突变产物,经序列鉴定证实为突变的人β-防御素-3基因. 将诱导后的菌体进行SDS-PAGE电泳,在Mr31 000处可见
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