【摘 要】
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目的 探究氧化应激条件下miR-23a对视网膜色素上皮细胞增殖、迁移的影响及其机制.方法 以不同浓度的H202诱导ARPE-19细胞氧化应激,qPCR检测诱导后ARPE-19细胞miR-23a的表达水
【机 构】
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西安市第四医院眼科,陕西西安710004
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目的 探究氧化应激条件下miR-23a对视网膜色素上皮细胞增殖、迁移的影响及其机制.方法 以不同浓度的H202诱导ARPE-19细胞氧化应激,qPCR检测诱导后ARPE-19细胞miR-23a的表达水平以及增殖和迁移能力的变化;ARPE-19细胞转染miR-23a mimic、NC(negative control)mimic后,采用MTT 和Transwell分别检测各组细胞的增殖和迁移能力;双荧光素酶报告实验验证miR-23a和GLS1的靶向关系;检测GLS1表达对氧化应激下ARPE-19细胞增殖和迁移能力的影响;检测转染miR-23a mimic及调节GLS1表达后ARPE-19细胞谷氨酰胺摄取能力,Western blot检测转染miR-23a mimic及调节GLS1表达后ARPE-19细胞p42/p44 MAPK、JNK磷酸化水平.结果 H2O2诱导后ARPE-19细胞miR-23a表达水平显著上调,细胞增殖和迁移能力显著下降;转染miR-23a mimic后ARPE-19细胞增殖和迁移能力显著抑制.荧光素酶报告实验显示GLS1为miR-23a的靶基因,下调GLS1表达后,显著抑制H2O2诱导的ARPE-19细胞增殖和迁移能力;上调miR-23a及下调GLS1的表达则抑制H2O2诱导ARPE-19细胞的谷氨酰胺的摄取及p42/p44MAPK、JNK磷酸化水平.结论 氧化应激通过上调视网膜色素上皮细胞miR-23a而抑制GLS1的表达进而抑制MAPK信号通路影响细胞的增殖和迁移.
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