【摘 要】
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目的 构建弓形虫 GJS 株表面抗原 1(SAG1) 重组表达质粒,研究 SAG1 蛋白疫苗诱导的保护性免疫作用.方法 根据 RH 株弓形虫 SAG1 基因序列设计 1 对引物,利用 PCR 方法 获得 S
【机 构】
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中国农业科学院兰州兽医研究所,甘肃农业大学动物医学院
【基金项目】
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国家科技支撑计划;公益性行业(农业)科研专项经费项目;甘肃省重大专项科技项目
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目的 构建弓形虫 GJS 株表面抗原 1(SAG1) 重组表达质粒,研究 SAG1 蛋白疫苗诱导的保护性免疫作用.方法 根据 RH 株弓形虫 SAG1 基因序列设计 1 对引物,利用 PCR 方法 获得 SAG1 基因,克隆入 pMD18-T 载体,测序后进行序列分析;重新设计引物将其亚克隆至原核表达载体 pET-30a 中,在大肠杆菌中经 IPTG 诱导表达;重组抗原经纯化和复性后免疫小鼠,ELISA 法测定其抗体滴度的变化,并用弓形虫速殖子攻击检测免疫保护力.结果 与已知的 SAG1 基因核苷酸序列 (S76248) 及其编码氨基酸序列的同源性分别为 99%、97%;表达的 SAG1蛋白以包涵体形式存在,该重组抗原能被羊抗弓形虫阳性血清所识别;经间接 ELISA 检测,小鼠免疫后产生了较高的抗体;动物保护性实验表明,虽然与对照组相比免疫组小鼠存活时间有一定的延长,但差异无显著性.结论 成功构建了弓形虫SAG1重组表达质粒,SAG1 蛋白疫苗诱导小鼠的免疫保护力不强.
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