【摘 要】
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研究克隆小鼠Egr 1基因启动子及其辐射诱导基因表达特性。方法 :用合成的一对引物 ,以BALB c小鼠基因组为模板 ,扩增出 44 9bp大小含 6个CC(A T) 6 GG基序的序列 ,通过亚克隆
【机 构】
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上海第二医科大学生物化学教研室!人类基因治疗研究中心,上海200025,上海第二医科大学生物化学教研室!人类基因治疗研究中心,上海200025,上海第二医科大学附属第九人民医院!上海200011
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研究克隆小鼠Egr 1基因启动子及其辐射诱导基因表达特性。方法 :用合成的一对引物 ,以BALB c小鼠基因组为模板 ,扩增出 44 9bp大小含 6个CC(A T) 6 GG基序的序列 ,通过亚克隆技术分别将其插入pBluescriptⅡ测序载体和pHGFP S6 5T报告载体中。利用测序载体对克隆的DNA序列进行分析 ,报告质粒载体经Li pofecTAMINE脂质体介导转染COS 7细胞后给予γ射线照射或H2 O2 处理 ,用流式细胞仪观察GFP表达阳性细胞数。结果 :PCR扩增的DNA片段经测序证实与文献报道完全一致 ,报告质粒转细胞实验结果提示 ,照射或H2 O2 处理可经Egr 1基因启动子而诱导GFP(绿色荧光蛋白 )的表达。结论 :成功地克隆了Egr 1基因启动子 ,经照射能诱导报告基因GFP的表达 ,为今后的进一步深入研究奠定了基础
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