【摘 要】
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目的 比较和评价不同条件下体外培养兔阴茎海绵体平滑肌细胞的纯度.方法 应用胶原酶消化法和组织贴块法分离培养幼兔海绵体平滑肌细胞.差速贴壁法纯化海绵体平滑肌细胞.采用
【机 构】
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上海交通大学附属第六人民医院泌尿外科,上海,200233;上海市组织工程研究与开发中心
【基金项目】
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上海交通大学医学院博士创新基金;国家自然科学基金
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目的 比较和评价不同条件下体外培养兔阴茎海绵体平滑肌细胞的纯度.方法 应用胶原酶消化法和组织贴块法分离培养幼兔海绵体平滑肌细胞.差速贴壁法纯化海绵体平滑肌细胞.采用α-平滑肌肌动蛋白(α-SM-actin)和肌球蛋白(Myosin)免疫荧光鉴定海绵体平滑肌细胞,波形蛋白(Vimentin)衬染检测成纤维细胞.流式细胞仪检测海绵体细胞表达α-SM-actin的阳性率,比较不同培养条件下海绵体平滑肌细胞的纯度.结果 体外培养的海绵体来源细胞在荧光显微镜下对α-SM-actin和Myosin仅有少量表达,随传代次数的增加,细胞表达α-SM-actin和Myosin的阳性率进一步降低.流式细胞仪检测酶消化法和贴块法原代培养的海绵体平滑肌细胞的纯度分别为16.91%和11.13%.经差速贴壁纯化后第1代海绵体平滑肌细胞的纯度分别提高到26.88%和21.98%.Vimentin免疫荧光检测到大量阳性表达.结论 目前常规方法体外分离、培养的海绵体平滑肌细胞纯度较低,大量海绵体间质来源的成纤维细胞混杂生长,差速贴壁法可在一定范围内提高海绵体平滑肌细胞的纯度.
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