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摘要：目的 建立化瘀祛痰颗粒的质量标准。方法 采用薄层色谱法对化瘀祛痰颗粒中党参、黄芪、绞股蓝、郁金进行定性鉴别；采用高效液相色谱法测定丹酚酸B的含量，色谱柱为Diamonsil C18柱，流动相为甲醇-乙腈-甲酸-水（30︰10︰1︰59），流速1.0 mL/min，检测波长286 nm，柱温30 ℃。结果 薄层鉴别各样品特征斑点显色清晰，阴性样品无干扰；高效液相色谱法测出丹酚酸B在0.142 5～1.425 0 ?g范围内与峰面积线性关系良好，r=0.999 7，平均回收率为98.45%，RSD=1.99%。结论 本方法准确可靠、专属性强、重复性好，可用于化瘀祛痰颗粒的质量控制。
关键词：化瘀祛痰颗粒；薄层色谱法；高效液相色谱法；质量标准
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2013）02-0065-03
化瘀祛痰颗粒由党参、黄芪、丹参、绞股蓝、茯苓等9味药组成，具有健脾益气、祛痰化瘀功效。该颗粒剂为辽宁中医药大学附属医院院内制剂，于2007年申请国家专利保护。为了有效控制该制剂质量，我们对处方中党参、黄芪、绞股蓝和郁金进行了薄层鉴别研究，并建立了丹酚酸B的高效液相色谱（HPLC）含量测定方法。
1 仪器与试药
Agilent 1100高效液相色谱仪（美国Agilent公司），紫外检测器；电子分析天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）；DS31200超声波清洗器（天津市东康科技有限公司）；硅胶G板，规格10×10 cm，厚度0.2 mm（青岛洋化工厂）。
2 方法与结果
2.1 定性鉴别
2.1.1 党参 取本品10 g，研细，加甲醇25 mL，超声处理30 min，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水15 mL使溶解，通过D101型大孔吸附树脂柱（内径为1.5 cm，柱高为10 cm），用水50 mL洗脱，弃去水液，再用50%乙醇50 mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取党参对照药材2 g和缺党参的处方药材10 g，加甲醇25 mL，同法制成对照药材溶液和阴性对照溶液。照薄层色谱法（2010年版《中华人民共和国药典》一部附录ⅥB）试验，吸取上述3种溶液各4 ?L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水（7︰1︰0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在100 ℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点[1]。
2.1.2 黄芪 取本品10 g，研细，加甲醇20 mL，加热回流1 min，滤过，滤液加于中性氧化铝柱（100～120目，5 g，内径为10～15 mm）上，用40%甲醇100 mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加水30 mL使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次20 mL，合并正丁醇液，用水洗涤2次，每次20 mL，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇0.5 mL使溶解，作为供试品溶液。另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。另取缺黄芪的处方药材10 g，加甲醇20 mL，同法制备黄芪阴性对照溶液。照薄层色谱法（2010年版《中华人民共和国药典》一部附录ⅥB）试验，吸取上述3种溶液各2 ?L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（13︰7︰2）的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点[2-3]。
2.1.4 郁金 取本品10 g，研细，加无水乙醇25 mL，处理30 min，放冷，滤过，滤液通过D101型大孔吸附树脂柱（内径为1.5 cm，柱高为10 cm），用水50 mL洗脱，弃去水液，再用乙醇50 mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加乙醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取郁金对照药材2 g和缺郁金的处方药材10 g，加无水乙醇25 mL，同法制成对照药材溶液和阴性对照溶液。照薄层色谱法（《中华人民共和国药典》一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述3种溶液各4 ?L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯（17︰3）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在100 ℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
2.2 丹酚酸B含量测定
2.2.2 对照品溶液的制备 取丹酚酸B对照品适量，精密称定，加75%甲醇制成每1 mL含0.095 mg的溶液，即得。
2.2.3 供试品溶液的制备 取本品内容物1.60 g，精密称取，置具塞锥形瓶中，精密加75%甲醇50 mL，密塞，称定重量，超声处理（功率250 W，频率50 kHz）60 min，放冷，密塞，再称定重量，用75%甲醇溶液补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.2.6 精密度试验 取浓度为0.095 mg/mL对照品溶液5 ?L，连续重复进样5次，记录峰面积，丹酚酸B峰面积RSD=1.05%，结果表明精密度良好。
2.2.7 重复性试验 取化瘀祛痰颗粒样品（批号20120501），按供试品溶液制备方法，平行操作6份，依法测定，进样量10 ?L，计算结果，RSD=1.64%。结果表明，本方法重复性良好。
2.2.8 稳定性试验 取同一供试品溶液，于0、2、4、6、8 h进样检测，依法测定，进样量10 ?L，结果表明，丹酚酸B峰面积RSD=1.59%，样品在8 h内稳定性良好。
2.2.9 加样回收率试验 精密称取化瘀祛痰颗粒样品（批号20120501，含量1.37 mg/g）0.8 g，分别精密加入丹酚酸B对照品溶液（0.095 mg/mL）10 mL，按供试品溶液制备方法，平行操作6份，依法测定，计算回收率，见表1，结果表明本方法回收率良好。
关键词：化瘀祛痰颗粒；薄层色谱法；高效液相色谱法；质量标准
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2013）02-0065-03
化瘀祛痰颗粒由党参、黄芪、丹参、绞股蓝、茯苓等9味药组成，具有健脾益气、祛痰化瘀功效。该颗粒剂为辽宁中医药大学附属医院院内制剂，于2007年申请国家专利保护。为了有效控制该制剂质量，我们对处方中党参、黄芪、绞股蓝和郁金进行了薄层鉴别研究，并建立了丹酚酸B的高效液相色谱（HPLC）含量测定方法。
1 仪器与试药
Agilent 1100高效液相色谱仪（美国Agilent公司），紫外检测器；电子分析天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）；DS31200超声波清洗器（天津市东康科技有限公司）；硅胶G板，规格10×10 cm，厚度0.2 mm（青岛洋化工厂）。
2 方法与结果
2.1 定性鉴别
2.1.1 党参 取本品10 g，研细，加甲醇25 mL，超声处理30 min，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水15 mL使溶解，通过D101型大孔吸附树脂柱（内径为1.5 cm，柱高为10 cm），用水50 mL洗脱，弃去水液，再用50%乙醇50 mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取党参对照药材2 g和缺党参的处方药材10 g，加甲醇25 mL，同法制成对照药材溶液和阴性对照溶液。照薄层色谱法（2010年版《中华人民共和国药典》一部附录ⅥB）试验，吸取上述3种溶液各4 ?L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水（7︰1︰0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在100 ℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点[1]。
2.1.2 黄芪 取本品10 g，研细，加甲醇20 mL，加热回流1 min，滤过，滤液加于中性氧化铝柱（100～120目，5 g，内径为10～15 mm）上，用40%甲醇100 mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加水30 mL使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次20 mL，合并正丁醇液，用水洗涤2次，每次20 mL，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇0.5 mL使溶解，作为供试品溶液。另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。另取缺黄芪的处方药材10 g，加甲醇20 mL，同法制备黄芪阴性对照溶液。照薄层色谱法（2010年版《中华人民共和国药典》一部附录ⅥB）试验，吸取上述3种溶液各2 ?L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（13︰7︰2）的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点[2-3]。
2.1.4 郁金 取本品10 g，研细，加无水乙醇25 mL，处理30 min，放冷，滤过，滤液通过D101型大孔吸附树脂柱（内径为1.5 cm，柱高为10 cm），用水50 mL洗脱，弃去水液，再用乙醇50 mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加乙醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取郁金对照药材2 g和缺郁金的处方药材10 g，加无水乙醇25 mL，同法制成对照药材溶液和阴性对照溶液。照薄层色谱法（《中华人民共和国药典》一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述3种溶液各4 ?L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯（17︰3）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在100 ℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
2.2 丹酚酸B含量测定
2.2.2 对照品溶液的制备 取丹酚酸B对照品适量，精密称定，加75%甲醇制成每1 mL含0.095 mg的溶液，即得。
2.2.3 供试品溶液的制备 取本品内容物1.60 g，精密称取，置具塞锥形瓶中，精密加75%甲醇50 mL，密塞，称定重量，超声处理（功率250 W，频率50 kHz）60 min，放冷，密塞，再称定重量，用75%甲醇溶液补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.2.6 精密度试验 取浓度为0.095 mg/mL对照品溶液5 ?L，连续重复进样5次，记录峰面积，丹酚酸B峰面积RSD=1.05%，结果表明精密度良好。
2.2.7 重复性试验 取化瘀祛痰颗粒样品（批号20120501），按供试品溶液制备方法，平行操作6份，依法测定，进样量10 ?L，计算结果，RSD=1.64%。结果表明，本方法重复性良好。
2.2.8 稳定性试验 取同一供试品溶液，于0、2、4、6、8 h进样检测，依法测定，进样量10 ?L，结果表明，丹酚酸B峰面积RSD=1.59%，样品在8 h内稳定性良好。
2.2.9 加样回收率试验 精密称取化瘀祛痰颗粒样品（批号20120501，含量1.37 mg/g）0.8 g，分别精密加入丹酚酸B对照品溶液（0.095 mg/mL）10 mL，按供试品溶液制备方法，平行操作6份，依法测定，计算回收率，见表1，结果表明本方法回收率良好。