【摘 要】
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目的:探讨hCREG表达与人血管平滑肌细胞增殖的量效关系。方法:构建强力霉素(Dox)调控表达的pRevTRE-hCREG重组载体;分别经G418及潮霉素筛选表达pRevTet-On、pRevTRE-hCREG的
【机 构】
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沈阳军区总医院全军心血管病研究所心内科
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目的:探讨hCREG表达与人血管平滑肌细胞增殖的量效关系。方法:构建强力霉素(Dox)调控表达的pRevTRE-hCREG重组载体;分别经G418及潮霉素筛选表达pRevTet-On、pRevTRE-hCREG的人血管平滑肌细胞株-HITASY细胞克隆;RT-PCR鉴定转染细胞克隆中抗性基因和插入基因的表达;Western blotting和免疫共沉淀检测不同浓度的强力霉素诱导后,HITASY细胞内及培养上清中hCREG的表达;流式细胞仪检测不同浓度的强力霉素诱导后,hCREG表达与细胞增殖的关系。结果:成功构建了强力霉素可调控表达的pRevTRE-hCREG重组载体;筛选出稳定表达双抗性基因的HITASY-hCREG细胞克隆;RT-PCR检测证实细胞克隆中G418及插入基因表达均为阳性;Western blotting及免疫共沉淀检测发现随强力霉素诱导剂量的增加(0、0.01、0.1、1mg/L),HITASY-hCREG细胞及培养上清中hCREG表达均呈剂量依赖性增加;流式细胞周期分析提示,hCREG表达增加后,HITASY-hCREG细胞的G1期细胞明显增加。结论:hCREG蛋白通过剂量依赖方式抑制人血管平滑肌细胞的增殖。
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