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一、菌种制作
1.母种。①培养基配方：200克马铃薯、20克葡萄糖、5克蛋白胨、3克磷酸二氢钾、1.5克硫酸镁，水1000毫升，pH为7。
②具体做法：首先将马铃薯去皮、洗净、挖去芽眼、切成薄片，称取200克，放人铝锅中用1000毫升清水加热煮沸，维持30分钟，煮至软而不烂为止。用双层湿纱布过滤，然后取滤液并补足蒸发损失的水分，再加入琼脂继续加热，待琼脂溶化后，添加葡萄糖及其他成分，搅拌均匀后准备装管。培养基配制后应趁热分装，装量约为整个试管体积的1/5，装管时勿使管内外壁沾上溶液，以免浸湿棉塞，污染杂菌，装管后塞上棉塞。棉塞的大小、松紧度应适宜，以用手提棉塞、试管不脱落为准。然后每10支度试管扎成一捆，棉塞上方用牛皮纸包好，避免灭菌时被水蒸汽浸湿。将上述培养基于1千克/平方厘米压力下灭菌30分钟，取出备用。冷却后在无菌条件下接菌，每支母种可以转接15-20支，然后在25℃恒温下，培养7-10天，待菌丝长满斜面，背面有黄色基内菌丝即为成熟。
2.液体菌种。①培养基配方：20克葡萄糖、20克可溶性淀粉、3克蛋白胨、3克磷酸二氢钾、1.5克硫酸镁，水1000毫升，pH为6。
②具体做法：将液体培养基分装于500毫升三角瓶中，每瓶加培养液200毫升，用12层纱布外加一层牛皮纸封口。30分钟灭菌后，将母种在无菌条件下用接种钩接人三角瓶中，每支斜面可接5瓶。接种后于25℃摇床培养7天，摇速160转/分钟，待形成均匀小球后即可使用。
3.培养基配制。每个罐头瓶(500毫升)装小麦粒(或大米)30克、加营养液45-50毫升(营养液配方：20克葡萄糖、5克蛋白胨、3克磷酸二氢钾、1.5克硫酸镁，水1000毫升，pH为6)。瓶口用聚丙烯薄膜封好，外用细绳扎口，在1千克/平方厘米压力下，灭菌60分钟，取出后放入接种室备用。灭菌后的大米培养基应松软而不烂，如果培养基水分太大，菌丝仅在表面生长，后期容易造成杂菌污染。如果太干，菌丝纤细无力，难以转色出草。一般每瓶200毫升的液体菌种要稀释成400毫升使用。每瓶加200毫升无菌水，灭菌时每个罐头瓶装200毫升水同时灭菌。
二、接种和养菌
1.接种。在无菌条件下将稀释好的液体菌种用连续注射器接种，每瓶菌种可接80瓶，方法是1人拿菌种瓶，另一人往培养基中扎破塑料膜注射，注射部位的封口薄膜要用酒精棉球擦拭消毒。大批量生产中可以采用专用接种枪，每瓶注射5毫升菌液，接完种罐头瓶移入培养室的培养架上进行培养。
2.养茵。接种后栽培瓶直立放置培养3-5天，使菌丝萌发定植后再上架培养，否则菌液及培养基会倒向一侧，导致出草不齐。初始阶段，为减少杂菌污染，温室宜保持在15-18℃，待料面布满虫草菌丝后，将温度提到20-22℃，相对湿度65％-70％，空气新鲜，15天左右菌丝即可吃透培养料，完成营养生长。菌丝培养不需要光，過早见光会影响产草量。
三、子实体培养
1.转色管理。经15天，料面白色菌丝浓密，菌丝穿透并长满培养基，此时增加光照，促进转色。转色温度在20-22℃，相列湿度75％，通气良好。为了促进转色，在封口膜上一般用大头针刺10个左右的小孔增加氧气含量，7天后即可出现米粒状原基。
2.出草管理。菌丝体成熟后，由白色逐渐转为桔黄色。室内应增加光照，白天利用自然散射光，保持100-200勒克斯，晚间可利用日光灯作光源，每天应不少于10小时光照，刺激原基形成。待料面突起形成小米粒状原基时，要适当通风，补充新鲜空气，每天通风两次，每次30分钟，为减少瓶内水分蒸发无需去掉封口薄膜，只需在薄膜上扎几个眼即可，保护室内温度18-22℃。空气相对温度85％-90％。蛹虫草有较强的趋光性，在子实体形成后，应调整培养瓶与光源的相对方向，或调整室内光源方向，以保证子实体的正常生长形态，从而提高产量。
四、采收加工
按照上述管理条件，经过15天左右，子实体高度可达8厘米。待子实体不再生长，其顶端出现许多小刺时，表明已成熟。采收时，用无菌镊子钳出子实体，重新包扎好瓶口，继续培养，20天左右，又可长出第二批子座，一般只采收2茬。采下的子实体要及时晾干或低温烘干，在干燥低温处保存。
122000辽宁省微生物科学研究院 孟庆国
1.母种。①培养基配方：200克马铃薯、20克葡萄糖、5克蛋白胨、3克磷酸二氢钾、1.5克硫酸镁，水1000毫升，pH为7。
②具体做法：首先将马铃薯去皮、洗净、挖去芽眼、切成薄片，称取200克，放人铝锅中用1000毫升清水加热煮沸，维持30分钟，煮至软而不烂为止。用双层湿纱布过滤，然后取滤液并补足蒸发损失的水分，再加入琼脂继续加热，待琼脂溶化后，添加葡萄糖及其他成分，搅拌均匀后准备装管。培养基配制后应趁热分装，装量约为整个试管体积的1/5，装管时勿使管内外壁沾上溶液，以免浸湿棉塞，污染杂菌，装管后塞上棉塞。棉塞的大小、松紧度应适宜，以用手提棉塞、试管不脱落为准。然后每10支度试管扎成一捆，棉塞上方用牛皮纸包好，避免灭菌时被水蒸汽浸湿。将上述培养基于1千克/平方厘米压力下灭菌30分钟，取出备用。冷却后在无菌条件下接菌，每支母种可以转接15-20支，然后在25℃恒温下，培养7-10天，待菌丝长满斜面，背面有黄色基内菌丝即为成熟。
2.液体菌种。①培养基配方：20克葡萄糖、20克可溶性淀粉、3克蛋白胨、3克磷酸二氢钾、1.5克硫酸镁，水1000毫升，pH为6。
②具体做法：将液体培养基分装于500毫升三角瓶中，每瓶加培养液200毫升，用12层纱布外加一层牛皮纸封口。30分钟灭菌后，将母种在无菌条件下用接种钩接人三角瓶中，每支斜面可接5瓶。接种后于25℃摇床培养7天，摇速160转/分钟，待形成均匀小球后即可使用。
3.培养基配制。每个罐头瓶(500毫升)装小麦粒(或大米)30克、加营养液45-50毫升(营养液配方：20克葡萄糖、5克蛋白胨、3克磷酸二氢钾、1.5克硫酸镁，水1000毫升，pH为6)。瓶口用聚丙烯薄膜封好，外用细绳扎口，在1千克/平方厘米压力下，灭菌60分钟，取出后放入接种室备用。灭菌后的大米培养基应松软而不烂，如果培养基水分太大，菌丝仅在表面生长，后期容易造成杂菌污染。如果太干，菌丝纤细无力，难以转色出草。一般每瓶200毫升的液体菌种要稀释成400毫升使用。每瓶加200毫升无菌水，灭菌时每个罐头瓶装200毫升水同时灭菌。
二、接种和养菌
1.接种。在无菌条件下将稀释好的液体菌种用连续注射器接种，每瓶菌种可接80瓶，方法是1人拿菌种瓶，另一人往培养基中扎破塑料膜注射，注射部位的封口薄膜要用酒精棉球擦拭消毒。大批量生产中可以采用专用接种枪，每瓶注射5毫升菌液，接完种罐头瓶移入培养室的培养架上进行培养。
2.养茵。接种后栽培瓶直立放置培养3-5天，使菌丝萌发定植后再上架培养，否则菌液及培养基会倒向一侧，导致出草不齐。初始阶段，为减少杂菌污染，温室宜保持在15-18℃，待料面布满虫草菌丝后，将温度提到20-22℃，相对湿度65％-70％，空气新鲜，15天左右菌丝即可吃透培养料，完成营养生长。菌丝培养不需要光，過早见光会影响产草量。
三、子实体培养
1.转色管理。经15天，料面白色菌丝浓密，菌丝穿透并长满培养基，此时增加光照，促进转色。转色温度在20-22℃，相列湿度75％，通气良好。为了促进转色，在封口膜上一般用大头针刺10个左右的小孔增加氧气含量，7天后即可出现米粒状原基。
2.出草管理。菌丝体成熟后，由白色逐渐转为桔黄色。室内应增加光照，白天利用自然散射光，保持100-200勒克斯，晚间可利用日光灯作光源，每天应不少于10小时光照，刺激原基形成。待料面突起形成小米粒状原基时，要适当通风，补充新鲜空气，每天通风两次，每次30分钟，为减少瓶内水分蒸发无需去掉封口薄膜，只需在薄膜上扎几个眼即可，保护室内温度18-22℃。空气相对温度85％-90％。蛹虫草有较强的趋光性，在子实体形成后，应调整培养瓶与光源的相对方向，或调整室内光源方向，以保证子实体的正常生长形态，从而提高产量。
四、采收加工
按照上述管理条件，经过15天左右，子实体高度可达8厘米。待子实体不再生长，其顶端出现许多小刺时，表明已成熟。采收时，用无菌镊子钳出子实体，重新包扎好瓶口，继续培养，20天左右，又可长出第二批子座，一般只采收2茬。采下的子实体要及时晾干或低温烘干，在干燥低温处保存。
122000辽宁省微生物科学研究院 孟庆国