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目的：对大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌所产β-内酰胺酶进行底物动力学研究。方法：从我院2008年分离并经Nitrocefin鉴定的产β-内酰胺酶的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中各随机挑选4株，以Kirby-Bauer法进行药敏试验检测，采用L-B作图法得出Km和Vmax。结果：8株细菌对β-内酰胺类抗生素均耐药，而对碳青霉烯类抗生素高度敏感；所产β-内酰胺酶对青霉素均有较强的水解作用，对第1代头孢菌素头孢唑林及头孢噻吩也有一定的水解作用，对第2代头孢菌素头孢呋辛和第3代头孢菌素头孢他啶及头孢噻肟的水解活性差异较大。