LY294002复合二氯乙酸盐对人肺动脉平滑肌细胞凋亡及AKT/GSK-3β/HK-2信号通路的影响

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目的 评价PI3K抑制剂LY294002复合二氯乙酸盐对人肺动脉平滑肌细胞凋亡及AKT/GSK-3β/HK-2信号通路的影响.方法 人肺动脉平滑肌细胞传代培养,第3-5代用于实验.细胞在完全培养基中生长72 h后,给予0.2%胎牛血清的培养基饥饿24 h,随后采用随机数字表法分为6组(n=6):对照组(C组)采用含0.2%胎牛血清的培养基进行培养;阳性对照组(F组)、LY294002组(L组)、不同浓度二氯乙酸盐组(D1组和D2组)和LY294002复合二氯乙酸盐组(LD1组)采用含10%胎牛血清的培养基进行培养.L组加入LY294002 2μmol/L;D1组和D2组分别加入二氯乙酸盐10、20mmol/L; LD1组加入LY294002(2 μmol/L)30 min后给予二氯乙酸盐10 mmol/L.细胞处理48 h后,采用流式细胞法测定细胞凋亡情况、细胞线粒体膜电势,采用Western blot法测定人肺动脉平滑肌细胞磷酸化AKT(p-Akt)、磷酸化糖原合成激酶-3β(p-GSK-3β)、己糖激酶-2(HK-2)蛋白的表达.结果 与C组比较,D2组及LD1组细胞凋亡率升高,细胞线粒体膜电势下降,F组细胞p-Akt、p-GSK-3β和HK-2蛋白表达上调(P< 0.05或0.01),F组、L组及D1组细胞凋亡率及细胞线粒体膜电势差异无统计学意义(P>0.05);与D2组比较,LD1组细胞凋亡率升高,细胞线粒体膜电势下降,细胞p-Akt、p-GSK-3β和HK-2蛋白表达下调(P<0.05或0.01);与F组比较,D2组及LD1组细胞p-Akt、p-GSK-3β和HK-2蛋白表达下调(P<0.01).结论 LY294002复合二氯乙酸盐可促进人肺动脉平滑肌细胞凋亡,可能与阻断AKT/GSK-3β/HK-2信号通路有关。

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