【摘 要】
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目的:构建人载脂蛋白O (apolipoprotein O, ApoO)表达质粒,用pET原核表达系统制备重组抗原Trx-ApoO融合蛋白.方法:以人类肝脏cDNA文库为模板,聚合酶链反应(PCR) 法扩增ApoO D
【机 构】
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中南大学湘雅二医院心血管内科,湖南远泰生物技术有限公司
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目的:构建人载脂蛋白O (apolipoprotein O, ApoO)表达质粒,用pET原核表达系统制备重组抗原Trx-ApoO融合蛋白.方法:以人类肝脏cDNA文库为模板,聚合酶链反应(PCR) 法扩增ApoO DNA,将测序正确的目的基因片段插入质粒pET-32a (+)相应位点构建重组质粒并转化E.coli BL 21 (DE3),经IPTG诱导表达、Ni-NTA 亲和层析制备Trx-ApoO.通过琼脂糖凝胶电泳、DNA测序及十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定重组质粒及表达的Trx-ApoO融合蛋白的正确性. 结果:PCR 扩增产物经琼脂糖凝胶电泳证实在SDS-PAGE上出现1条519 bp 的基因片段.DNA测序结果显示插入片段符合GenBank 公布的人ApoO基因序列,重组质粒构建成功.ApoO cDNA基因片段经IPTG诱导表达重组蛋白,Ni-NTA柱亲和纯化后SDS-PAGE电泳分析表明在相对分子质量34 kD 左右出现新的蛋白条带,与目标分子质量相符.结论:成功克隆出人ApoO基因, 重组表达出Trx-ApoO蛋白.
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