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采用分步扩增连接的方法将口蹄疫病毒结构蛋白基因P1-2A、3C蛋白酶基因和3D聚合酶基因按正确的读码框依次连接克隆入pGEM-T 载体.然后,将切取的目的基因亚克隆入腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV.构建成功的2个重组穿梭质粒经测序鉴定,含有完整的目的基因表达盒,穿梭质粒可与腺病毒骨架载体进行细菌内同源重组,以产生重组腺病毒载体.