【摘 要】
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目的:建立一种同时快速检测肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7和霍乱弧菌O139的基因芯片,并验证该芯片的特异性和敏感性.方法:选择EHEC O157:H7的产志贺样毒素基因stx1、stx2和
【机 构】
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军事医学科学院放射与辐射医学研究所,内蒙古农业大学动物科学与医学学院
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目的:建立一种同时快速检测肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7和霍乱弧菌O139的基因芯片,并验证该芯片的特异性和敏感性.方法:选择EHEC O157:H7的产志贺样毒素基因stx1、stx2和β-葡糖醛酸糖苷酶基因(uidA);霍乱弧菌O139的肠毒素A亚单位(ctxA)、毒力协调菌毛A亚单位(tcpA)、糖基转移酶(glycosotransferase LPSgt)基因序列分别设计引物和探针,反向引物用荧光素Cy3标记,探针在3′端氨基修饰.在优化的PCR和杂交反应条件下,分别进行三重PCR扩增,产物混合后与芯片进行杂交,产生特异性荧光信号,进一步筛选探针.随后将筛选出的探针制备芯片用于检测临床样本.结果:PCR产物在相应探针处均产生特异性杂交信号,临床样本检测结果表明,此芯片比常规细菌学检测方法灵敏.结论:所研制的同时定性检测EHEC O157:H7和霍乱弧菌O139的基因芯片是特异、灵敏而且快速的,为这两种肠道致病菌感染的快速诊断提供了新的方法.
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