【摘 要】
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目的重组表达抗纤溶酶原激活剂抑制剂(PAI)作用的组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)突变体(PA1 t-PA),经诱导表达、复性和纯化后进行生物学活性和酶动力学分析。方法构建pBV220-t-P
【机 构】
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河北北方学院研究生部,中国人民解放军空军总医院临床检验中心
【基金项目】
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国家科技重大专项(2009ZX09103-603)~~
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目的重组表达抗纤溶酶原激活剂抑制剂(PAI)作用的组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)突变体(PA1 t-PA),经诱导表达、复性和纯化后进行生物学活性和酶动力学分析。方法构建pBV220-t-PA重组表达质粒,经DNA测序确认后,转化至大肠杆菌DH5α,温控诱导表达,凝胶过滤法对包涵体蛋白进行初步纯化,复性后,过刺桐胰蛋白酶抑制剂亲和层析柱纯化,酶动力学分析其活性。结果经测序t-PA突变体的DNA序列正确,表达蛋白占总菌体蛋白的30%,经纯化后纯度>95%,比活性为4.2×108 IU.g-1,t-PA突变体与PAI-1反应后其活性未受到抑制。t-PA突变体酶的米氏常数Km为0.3298μmol·L-1,最大水解速度Vmax为0.0476μmo·lmin-1.g-1。结论 t-PA突变体能够明显抵抗PAI的抑制作用,并具有良好的生物活性。
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