【摘 要】
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探讨葛根素促进成骨细胞增殖分化中miR-34a与Atg4b的作用,以期了解具体分子机制.方法分别加入α-MEM完全培养基和1μmol/L浓度葛根素对MC3T3-E1细胞进行培养.待72h后,实时荧
【机 构】
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南京市江宁中医院 江苏 南京 211100;南京中医药大学 江苏 南京 210023
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探讨葛根素促进成骨细胞增殖分化中miR-34a与Atg4b的作用,以期了解具体分子机制.方法分别加入α-MEM完全培养基和1μmol/L浓度葛根素对MC3T3-E1细胞进行培养.待72h后,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法分别检测miR-34a和ATG4B的RNA水平.生物学信息预测miR-34a与小鼠ATG4B基因的靶点.双荧光素酶报告基因法验证miR-34a与小鼠ATG4B基因的靶向关系.通过干扰miR-34a表达水平后测定ATG4B mRNA的水平,并分别用CCK-8法和碱性磷酸酶(ALP)法测定MC3T3-E1细胞增殖活力以及分化水平.结果示葛根素组miR-34a的mRNA表达水平显著低于对照组,而ATG4B的mRNA的表达水平较对照组显著上调,(P<0.05).双荧光素酶报告基因检测显示,mmu-miR-34a-5p作用后,ATG4B相较对照组活性降低(P<0.05),结论葛根素能下调靶向ATG4B的miR-34a,从而提高ATG4B的表达促进成骨细胞的增殖和分化.
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