【摘 要】
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目的制备转人α1,2岩藻糖基转移酶(HT)基因小鼠显微注射DNA片段.方法引物两端设计酶切识别位点,聚合酶链反应(PCR)扩增HT cDNA全长序列,两端含有EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ酶切识序列;
【机 构】
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天津市泌尿外科研究所分子生物学研究室,300211
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目的制备转人α1,2岩藻糖基转移酶(HT)基因小鼠显微注射DNA片段.方法引物两端设计酶切识别位点,聚合酶链反应(PCR)扩增HT cDNA全长序列,两端含有EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ酶切识序列;回收HTcDNA片段并与PMD18-T载体连接,EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切纯化质粒鉴定;EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切pMD18-HT cDNA重组质粒和pCMV-MCS质粒,回收HT cDNA片段和pCMV-MCS质粒片段,进而连接,转化感受态细菌,纯化质粒对其进行酶切、PCR和测序鉴定;Pvu Ⅰ和Not Ⅰ依次单酶切重组质粒pCMV-MCS-HT cDNA,回收大小约2.85kb片段,溶于适量显微注射用缓冲液.结果成功构建了重组质粒pCMV-MCS-HT cDNA,酶切回收了2.85kb的显微注射DNA片段.结论通过基因工程技术可以获得转人HT基因小鼠显微注射DNA片段,包含基因表达元件,可以用于显微注射法建立转人HT基因小鼠.
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