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目的
观察细胞因子信号阻抑蛋白1(SOCS1)对脑源性神经干细胞(NSCs)增殖、分化的调控作用。
方法构建含有目的基因SOCS1的慢病毒,感染体外培养的脑源性NSCs。实验分为3组:SOCS1组,空载体组,磷酸盐缓冲液(PBS)组。用Western blot方法观察3组细胞中SOCS1蛋白的表达;用免疫组织化学和Western blot方法观察3组细胞中NSCs标志物巢蛋白(Nestin)、神经元标志物微管相关蛋白2(MAP2)、少突胶质细胞标志物髓鞘碱性蛋白(MBP)、星型胶质细胞标志物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。
结果含目的基因SOCS1的慢病毒能够有效感染脑源性NSCs,感染慢病毒后24 h与72 h,SOCS1组中SOCS1蛋白与MAP2蛋白的表达持续增加,与空载体组和PBS组比较,SOCS1蛋白在24 h后为4.34倍和4.05倍(P=0.000、0.000),72 h后为9.25倍和10.17倍(P=0.000、0.000);MAP2蛋白在24 h后为1.06倍和1.08倍(P=0.005、0.001),72 h后为1.63倍和1.8倍(P=0.000、0.000);Nestin蛋白在病毒感染后24 h表达增加,与空载体组和PBS组比较,分别为1.10倍和1.06倍(P=0.000、0.037);感染慢病毒后72 h,MBP合成增加,与空载体组和PBS组比较,分别为2.27倍和2.27倍(P=0.000、0.000);GFAP合成减少,与空载体组和PBS组比较,分别为0.50倍和0.49倍(P=0.005、0.001)。
结论过表达SOCS1能够促进NSCs增殖,过表达SOCS1能够促进NSCs向神经元和少突胶质细胞分化,同时抑制NSCs向星形胶质细胞分化。