甜叶悬钩子多糖的提取纯化、结构分析及其生物活性的研究

来源 :湘潭大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:LIUANQING5201314
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目前,多糖是生命科学领域的三大研究热点之一,尤其是植物多糖,具有调节免疫、抑制肿瘤生长、抗疲劳、降血糖等广泛的生物活性。甜叶悬钩子属于蔷薇科悬钩子属植物,含有黄酮、茶多酚、糖苷类等活性物质,其中多糖含量较高,具有甜味,又称甜茶,主要产于广西一带,在民间应用历史悠久,常做茶饮,可用于防病治病。本实验主要研究其多糖的结构及生物活性。通过热水和氢氧化钠作为溶剂分别从甜叶悬钩子叶中提取得到粗多糖,随后经DEAE-52柱层析分离纯化分别得到三种纯化多糖,总共得到八种甜叶悬钩子多糖。利用间羟基联苯法、苯酚-硫酸法和考马斯亮蓝法分别测得八种甜叶悬钩子多糖的糖醛酸、中性糖及蛋白质含量,通过凝胶渗透色谱法(GPC)、气相色谱法(GC)测得它们的平均分子量和单糖组成,通过红外光谱法(IR)、紫外光谱法(UV)、核磁共振(NMR)、高碘酸氧化以及甲基化反应等获知它们主要的结构信息。通过体外抗氧化实验(DPPH·自由基、ABTS·自由基)和体外抗凝血实验,探究甜叶悬钩子多糖的抗氧化及抗凝血生物活性,结合结构信息探讨八种甜叶悬钩子多糖的生物活性与提取方法、结构的关系。主要结果如下:结构分析表明:(1)水提和碱提得到的八种甜叶悬钩子多糖的中性糖、蛋白质、平均分子量及单糖组成有所不同。(2)碱提甜叶悬钩子粗多糖平均分子量大于水提甜叶悬钩子粗多糖。(3)八种甜叶悬钩子多糖主要由核糖、阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖组成,但各单糖的摩尔比不同。(4)紫外光谱表明八种甜叶悬钩子多糖的糖肽键均为O-糖苷键。(5)红外光谱表明八种甜叶悬钩子以β构型为主。(6)结合单糖组成、红外、紫外、甲基化及核磁共振推断水提甜叶悬钩子粗多糖的主链重复结构含有[1→)-β-D-Glu-(4→],而碱提甜叶悬钩子粗多糖的主链重复结构含有[1→)-β-D-Gal-(6→]。(7)刚果红实验表明八种甜叶悬钩子多糖不具有三股螺旋结构。生物活性研究表明:(1)从DPPH·自由基和ABTS·自由基清除实验中可以看出,水提和碱提的甜叶悬钩子粗多糖均有一定体外抗氧化能力,且水提甜叶悬钩子粗多糖抗氧化能力优于碱提甜叶悬钩子粗多糖。(2)由体外抗凝血实验可以看出,水提和碱提甜叶悬钩子粗多糖均有一定程度的体外抗凝作用,尤其在延长APTT方面表现最为突出,即WRSL、ARSL主要是通过内源性凝血起到抗凝的作用。(3)无论是体外抗氧化还是抗凝血实验,含有1→4连接糖苷键的甜叶悬钩子多糖活性均优于1→6连接糖苷键的甜叶悬钩子多糖。
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