论文部分内容阅读
目的分析亲代人内毒索结合肽一级结构，选择可能影响其生物学活性的氨基酸对应碱基位点进行突变，克隆基因突变体mEBP基因并研究其蛋白表达。方法以亲代EBP基因为基础，结合DNASIS软件理化性质分析确定突变碱基，应用PCR定点诱变技术进行第5、18位谷氩酰胺→赖氩酸的定点突变。并将其克隆至原核融合表达载体pinpoint Xa-3，转化大肠杆菌BL21（DE3）pLysS进行表达，经Westernblot鉴定。结果突变EBP基因13及52位核苷酸由C突变为A，构建的阳性重组子经酶切及测序鉴定证实与设计序列完全