【摘 要】
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目的获得重组抗原85A(rAg85A),研究其免疫学特性,评价其在结核病血清学诊断中的价值。方法应用基因工程技术克隆、表达、纯化Ag85A蛋白,通过Western印迹分析其抗原性。分别以
【机 构】
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中国人民解放军第309医院结核病研究中心
【基金项目】
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总后勤部卫生部科学基金资助项目(编号:2002-12)
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目的获得重组抗原85A(rAg85A),研究其免疫学特性,评价其在结核病血清学诊断中的价值。方法应用基因工程技术克隆、表达、纯化Ag85A蛋白,通过Western印迹分析其抗原性。分别以结核分支杆菌纯蛋白衍生物(PPD)或纯化的rAg85A蛋白为抗原,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)及结核病一步法检测血清中抗结核抗体。结果重组质粒pET30a-Ag85A测序表明与报道的序列相同。它在大肠杆菌BL21(DE3)细胞内以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的2％左右,Western印迹分析它与抗结核分支杆菌多克隆抗体具有良好的免疫反应性。纯化的rAg85A样品纯度约85％左右,每100 ml培养菌可获得2 mg左右的重组蛋白。以33例正常人血清的OD值+2s为正常界限值,一步法的特异性和敏感性分别为87.9％和65.6％;PPD分别为93.9％和62.5％;rAg85A分别为93.9％和15.6％。结论pET30a-Ag85A大肠杆菌工程菌能以包涵体形式表达rAg85A蛋白,该蛋白具有较高的抗原特异性,但检测抗结核抗体的灵敏度低。
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