重组人组织型纤溶酶原激活剂衍生物在毕赤酵母中的表达

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目的 在毕赤酵母中表达重组人组织型纤溶酶原激活剂衍生物(rPAm),并检测rPAm的活性。方法 用PCR从质粒pLFrGGI上扩增出目的蛋白(rPAm)基因,再亚克隆到酵母表达载体pMEX9K中,转化到宿主菌GS115,菌落PCR鉴定转化子,重组酵母经甲醇诱导后,通过SDS—PAGE及Western—blot分析鉴定表达产物,再通过层析法纯化目的蛋白,用溶圈法测定目的蛋白的活性。结果 表达的重组蛋白分子量约为50kD。纯化后的目的蛋白的纯度可达到95%。Western—blot显示能与抗tPA抗体特异性结
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