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利用套叠PCR技术对轮状病毒外壳抗原蛋白VP4基因进行了定点突变,将改造后的基因插入pBI121构建植物表达载体。在设计PCR引物时,引入植物表达载体pBI121具有的克隆位点BamH Ⅰ和SacⅠ,利用BamH Ⅰ和Sac Ⅰ切除pBI121上的GUS基因并使载体质粒线性化,用同样的2种酶消化DTVP4克隆载体获得VP4基因片段.使之形成与线性化pBI121质粒相同的粘性末端。在T4DNA连接酶的作用下,将线性化DBI121质粒和酶切后的VP4基因片段连接成新的重组质粒pBI121/VP4,通过直接转化