观察苦参碱对体外人横纹肌肉瘤(RMS)RD细胞株增殖和凋亡的影响,研究苦参碱对人RMS RD细胞株中β–catenin与原癌基因Bcl–2及凋亡基因Caspase–3的影响及其表达关系,探索Wnt/β–catenin通路在RMS发生过程中的作用机制。
方法应用不同质量浓度苦参碱(0.5、1.0、1.5、2.0 g/L)分别作用人RMS RD细胞株48 h;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同水平苦参碱对RD细胞的增殖抑制率;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法检测β–catenin、Bcl–2及Caspase–3蛋白的表达。
结果MTT检测对照组及各实验组增殖抑制率分别为(13.70±0.25)%、(33.16±0.11)%、(42.96±0.90)%、(56.26±0.79)%和(67.89±0.63)%;流式细胞仪检测对照组及各实验组凋亡率分别为(5.49±0.96)%、(17.23±5.03)%、(25.84±4.17)%、(36.08±3.68)%、(47.79±4.82)%;Western blot结果显示对照组β–catenin和Bcl–2蛋白表达最高,而Caspase–3表达量最低,各浓度组β–catenin和Bcl–2的表达明显降低,而Caspase–3的表达明显增高,且表现明显的质量浓度依赖性。以上检测各浓度组与对照组比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。
结论苦参碱能明显抑制RMS RD细胞的增殖,并诱导其凋亡;苦参碱可下调Wnt/β–catenin通路中关键分子β–catenin的表达,降低Bcl–2的表达,上调Caspase–3表达;Wnt/β–catenin信号通路在苦参碱诱导的RD细胞凋亡过程中发挥重要作用,其下游调控蛋白Bcl–2及Caspase–3共同参与了这一过程的调控。