【目的】构建牙菌斑培养菌群宏基因组文库,筛选牙菌斑生物膜中细菌的抗生素耐药基因。【方法】采集20例无龋健康人的集合牙菌斑并进行厌氧培养。提取牙菌斑培养菌群宏基因组构建Fosmid文库。用卡那霉素、四环素及氨苄西林对文库进行筛选,并对筛选到的抗性Fosmid克隆进行末端测序、亚克隆构建、亚克隆测序和序列分析。【结果】构建了牙菌斑培养菌群宏基因组Fosmid文库,插入片段长度在36 48 kb间约有15 120个克隆,插入片段长度小于36 kb的约有3 360个克隆。筛选获得一个氨基糖苷类双功能修饰酶AacA-AphD基因、一个核糖体保护蛋白型四环素耐药基因tet(M)及一个C家族-内酰胺酶基因。【结论】证实了可以通过构建宏基因组文库的方法来筛选牙菌斑培养菌群中的抗生素耐药基因。