【摘 要】
：
为构建能稳定携带新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)血凝素-神经氨酸酶蛋白(Hemagglutinin-neuraminidase protein,HN)基因的减毒鼠伤寒沙门菌Ⅲ型分泌系统,从pMD18-T-HN中扩增出NDV HN基因,并将其克隆入载体pYA3493-sopENt100,构建重组载体pYA3493-sopENt100-HN,然后将其电转化至减毒鼠伤寒沙门菌△crp△asdSL1344,并对其重组菌的生长特性、遗传稳定性、表达特性和毒力特性等进行分析.结果显
【机 构】
：
洛阳职业技术学院宠物与人类健康工程技术中心,河南洛阳471900;河南科技大学动物科技学院/洛阳市活载体生物材料与动物疫病防控重点实验室,河南洛阳471023;新乡市动物卫生监督所,河南新乡45300
论文部分内容阅读
为构建能稳定携带新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)血凝素-神经氨酸酶蛋白(Hemagglutinin-neuraminidase protein,HN)基因的减毒鼠伤寒沙门菌Ⅲ型分泌系统,从pMD18-T-HN中扩增出NDV HN基因,并将其克隆入载体pYA3493-sopENt100,构建重组载体pYA3493-sopENt100-HN,然后将其电转化至减毒鼠伤寒沙门菌△crp△asdSL1344,并对其重组菌的生长特性、遗传稳定性、表达特性和毒力特性等进行分析.结果显示,携带NDV HN基因的重组减毒鼠伤寒沙门菌△crp△asd SL1344(pYA3493-sopENt100-HN)构建成功;重组菌△crp△asd SL1344(pYA3493-sopENt100-HN)的生长趋势与互补菌△crp△asd SL1344(pYA3493-sopENt100)和缺失菌4crp4asd SL1344相似,与亲本菌株SL1344有明显差异;重组菌能够稳定表达HN基因;减毒鼠伤寒沙门菌Ⅲ型分泌系统能够有效递呈HN基因,并诱导其在鸡胚成纤维细胞(Chicken embryo fibroblast,CEF)内表达;重组菌的LD50与互补菌和缺失菌没有明显差异,与亲本菌株SL1344差异较大.以上结果表明,成功构建了携带NDVHN基因的新型减毒鼠伤寒沙门菌Ⅲ型分泌系统△crp△asd SL1344(pYA3493-sopENt100-HN),能够有效递呈NDV HN基因并使其高效表达,且安全性高,遗传稳定.
其他文献
分离土壤中能够降解丙酸的细菌菌株,以丰富对自然界中参与丙酸代谢细菌种类的科学认识.采用土样预培养法、含丙酸唯一碳源固体培养基培养法,结合形态学观察和16S rDNA基因序列同源性分析,筛选和鉴定能够分解代谢丙酸的细菌菌株,并利用生物信息学分析筛选到的菌株中丙酸代谢路径2-甲基柠檬酸循环关键酶基因的分布情况.结果表明,共分离得到10株能够利用丙酸碳源的细菌菌株.经鉴定,该10株细菌分别为芽孢杆菌属(Bacillus)3株,红球菌属(Rhodococcus)2株,节杆菌属(Arthrobacter)、链霉菌属
为探索外源NO对镉(Cd)胁迫下生菜种子萌发和幼苗生长的缓解效应,研究不同浓度(100、150、200、250 μmol/L)外源SNP(硝普钠,NO供体)对100 μmol/L Cd胁迫下生菜种子萌发、幼苗生长及抗氧化特性的影响.结果表明,外源NO对Cd胁迫下生菜种子发芽率和发芽势无显著影响,但总体上可显著提高生菜幼苗生长、叶绿素含量和过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)活性,显著降低丙二醛(MDA)含量.在Cd胁迫下添加250 μmol/LSNP处理效果最好,POD、C
利用42个优质小麦(Triticum aestivum)品种籽粒发芽指数对6个小麦穗发芽抗性相关基因[Tamyb 10、TaDFR(Dihydroflavone reductase)、TaVp-1(Viviparous-1)、TaSdr(Seed dormancy)、TaPM 19-A1(Plasma membrane 19-A1)、TaMFT(Mother of FT and TFL1)]的分子标记的有效性进行验证,以期为抗穗发芽优质小麦品种的筛选及选育奠定基础.结果表明,小麦穗发芽抗性相关基因Tamy
以合苞橐吾(Ligularia schmidtii)为试验材料,研究不同叶面肥[尿素(CK)、高碳有机叶面肥(T1)、氨基酸叶面肥(T2)、高碳有机叶面肥和氨基酸叶面肥按1∶1混合(T3)]对合苞橐吾生长发育、产量的影响,综合比较与分析确定最优处理,并进行品质指标的测定,以期为建立高产优质的施肥方案提供参考.结果表明,与CK相比,T1和T3处理均可显著提高合苞橐吾的叶长、叶宽及株高;T1、T2、T3处理可显著提高合苞橐吾鲜叶产量,每公顷产量较CK分别提高25.39％、44.86％、59.13％.总体上以T
为探究不同采收时间对雪茄烟叶产质量的影响,以德雪3号为材料,通过大田试验和室内试验,研究雪茄烟叶3个采收时间(中部叶、上部叶分别于移栽后70、77d第1次采收,之后每隔10d采收1次,共采3次)下烟叶调制时的含水率、发酵后的物理特性、常规化学成分含量和中性致香物质含量以及经济性状的差异.结果表明,采收越晚,调制期间烟叶失水速率越快;中部叶移栽后80 d采收,发酵后烟叶的拉力、叶厚度等物理性状表现较优,总氮含量较移栽后70 d采收下降0.180个百分点,烟碱含量较移栽后90 d采收升高0.450个百分点,烟
为探寻准确高效的冬小麦关键发育时期监测方法,首先利用归一化植被指数测量仪(SRS-NDVI)监测了河南省鹤壁市农业气象试验站2017—2018、2018—2019年度冬小麦生长季的时序归一化植被指数(Normalized difference vegetation index,NDVI);然后,采用邻域差值分析法重构时序NDVI,并运用S-G滤波法(Savitzky-golay,S-G)平滑处理时
为研究水牛瘦素(Leptin)的功能,构建leptin基因真核表达载体EGFP-leptin,检测leptin在NIH/3T3细胞中的表达并分析其生物学特性.根据水牛leptin基因序列设计引物,并在上下游引物分别添加Hind Ⅲ和BamH Ⅰ酶切位点,以pMD18-T-leptin载体为模板,PCR扩增leptin基因,并亚克隆至载体pEGFP-Nl,以双酶切和DNA测序鉴定EGFP-leptin重组质粒;然后采用脂质体2000将重组质粒转染到NIH/3T3细胞,经G418筛选,获得稳定转染的细胞株,R
为了解牛肺炎支原体临床分离菌株(HN12)与标准菌株(PG45)蛋白质差异表达情况,采用定量蛋白质组学研究策略,在牛支原体临床分离菌株(HN12)和标准菌株(PG45)的全蛋白质中进行差异蛋白质鉴定,并进行生物信息学分析.结果表明,共鉴定2402个蛋白质,其中存在显著差异的有66个.上调蛋白质数量为25个,下调蛋白质数量为41个.鉴定出的蛋白质主要有膜蛋白、跨膜蛋白、脂蛋白、延长因子、膜脂蛋白P81、伴侣蛋白、可变表面脂蛋白和ABC转运蛋白等.
核设施的声环境影响评价是最新的环境影响评价技术导则的要求.文章首次应用噪声预测软件Cadna/A,以拟建核设施的总平面布置图为基础,优化相关计算参数,建立模型,预测了其正常运行对周围环境的噪声影响.结果表明,该核设施对厂界的噪声贡献值满足GB 12348—2008《工业企业厂界环境噪声排放标准》3类标准限值要求,对厂址周围声环境质量影响较小.
为研究姜曲海猪FoxO3基因组织表达和遗传多态性与肉质性状的关联性,采用PCR-SSP分子标记技术,分析了 112头姜曲海猪FoxO3基因第二外显子的遗传变异情况,利用实时荧光定量PCR检测姜曲海猪心脏、肝脏、脾脏、肾脏、腹脂、皮下脂肪、背最长肌、比目鱼肌、腓肠肌和半腱肌中FoxO3基因的表达量.姜曲海猪FoxO3基因第二外显子500 bp位点存在多态性,得到TT、CC及TC 3种基因型,T基因频率为0.424,表现为中度多态(PIC=0.369);试验猪群的基因频率和基因型频率都处于哈迪温伯格平衡状态(