【摘 要】
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目的 探讨原代肝细胞外泌体对肝星状细胞（HSC）活化的影响。方法 在原位两步胶原酶灌流法的基础上，分别分离培养小鼠原代肝细胞及HSC，采用肝细胞糖原染色法和细胞角蛋白18（CK-18）细胞化学染色法鉴定原代肝细胞，采用α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）细胞免疫荧光染色法鉴定原代HSC;采用exo Easy Maxi Kit试剂盒提取肝细胞外泌体，用电镜法、纳米颗粒跟踪分析（NTA）及蛋白免疫印迹法（
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（81960119）； 贵州省卫生健康委科学技术基金项目（gzwkj2023-002）；
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目的 探讨原代肝细胞外泌体对肝星状细胞（HSC）活化的影响。方法 在原位两步胶原酶灌流法的基础上，分别分离培养小鼠原代肝细胞及HSC，采用肝细胞糖原染色法和细胞角蛋白18（CK-18）细胞化学染色法鉴定原代肝细胞，采用α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）细胞免疫荧光染色法鉴定原代HSC;采用exo Easy Maxi Kit试剂盒提取肝细胞外泌体，用电镜法、纳米颗粒跟踪分析（NTA）及蛋白免疫印迹法（Western blot）鉴定肝细胞外泌体;将肝细胞外泌体与活化HSC共培养24 h，采用逆转录-实时定量PCR（qRT-PCR）法检测HSC中α-SMA及Ⅰ型胶原（COL1A1） mRNA表达。结果 原位两步胶原酶灌流法成功分离培养获得小鼠原代肝细胞及HSC，肝细胞糖原染色法及CK-18细胞化学染色法证实原代肝细胞纯度＞ 95%，免疫荧光染色显示HSC的α-SMA阳性率＞90%; exo Easy Maxi Kit试剂盒提取的肝细胞外泌体在电镜下呈圆形或椭圆形，NTA结果显示其直径约140 nm,Western blot实验可见外泌体标志物分化抗原9（CD9）和肿瘤易感基因101（TSG101）表达;与空白对照组比较，HSCs与肝细胞外泌体共培养后HSCs的α-SMA及COL1A1 mRNA表达水平降低（P ＜0.05）。结论 成功提取原代肝细胞外泌体，该外泌体可抑制HSC活化。
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