【摘 要】
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目的 探讨肠道病毒71型(EV71)对人神经胶质瘤U251细胞线粒体动力学的影响.方法 采用非洲绿猴肾细胞Vero对EV71进行增殖,用Reed-Muench公式计算病毒液的50％细胞感染剂量(50％ tis
【机 构】
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遵义医科大学医学微生物学教研室 遵义563000“,”贵州省普通高等学校传染病与生物安全特色重点实验室 遵义563000
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目的 探讨肠道病毒71型(EV71)对人神经胶质瘤U251细胞线粒体动力学的影响.方法 采用非洲绿猴肾细胞Vero对EV71进行增殖,用Reed-Muench公式计算病毒液的50％细胞感染剂量(50％ tissue culture infective dose,TCID50);将EV71接种于U251细胞,光学显微镜下观察细胞形态,激光共聚焦显微镜下观察线粒体形态,透射电镜观察线粒体超微结构的改变;West blot检测线粒体分裂蛋白Drp1、p-Drp1 (S637)和融合蛋白Opa1的表达水平;ATP试剂盒检测线粒体ATP水平;MitoSOX染色检测线粒体超氧化物水平.结果 EV71的TCID50为10-54/0.1 mL;EV71感染U251细胞24 h、48 h后细胞明显出现皱缩、变圆或死亡.激光共聚焦显微镜和透射电镜结果显示,EV71感染后细胞线粒体明显延长,线粒体嵴模糊不清;West bolt结果显示,EV71感染U251细胞24 h和48 h后,Drp1、Opa1表达降低,而p-Drp1 (S637)在48h表达升高,且差异有统计学意义(P＜0.05).EV71感染48h后,与未感染EV71的U251细胞相比,线粒体ATP生成减少,线粒体超氧化物水平升高(P＜0.05).结论 EV71感染U251细胞后,能引起线粒体形态及动力学改变,进而导致线粒体功能的变化,这可能是其引起神经系统功能紊乱的机制之一.
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