【摘 要】
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利用双重杂交筛选法从已经构建的A型新生隐球菌DNA克隆库(pCN)中筛选特异性探针。依据克隆库载体pUC18的核苷酸序列设计并合成一对引物,PCR扩增克隆库的插入片段,制备杂交膜。同位素标记26种鉴别菌及正常人的总DNA与克隆库的PCR产物杂交,获得28个候选克隆。同位素标记候选克隆的插入片段(以低熔点胶回收)与上述27种鉴别DNA杂交,获得特异性探针。结果:从已经构建的pCN中筛选出了3个特异性
【机 构】
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第二军医大学长征医院皮肤科真菌病研究室,上海200003,第二军医大学长征医院皮肤科真菌病研究室,上海200003,复旦大学遗传学研究所,第二军医大学长征医院皮肤科真菌病研究室,上海200003
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利用双重杂交筛选法从已经构建的A型新生隐球菌DNA克隆库(pCN)中筛选特异性探针。依据克隆库载体pUC18的核苷酸序列设计并合成一对引物,PCR扩增克隆库的插入片段,制备杂交膜。同位素标记26种鉴别菌及正常人的总DNA与克隆库的PCR产物杂交,获得28个候选克隆。同位素标记候选克隆的插入片段(以低熔点胶回收)与上述27种鉴别DNA杂交,获得特异性探针。结果:从已经构建的pCN中筛选出了3个特异性探针:pCNⅡA6、pCNⅡB5、pCNⅢG1,其中pCNⅡA6只与A型新生隐球菌的DNA杂交,而不与其它鉴别DNA杂交,为A型特异性克隆;pCNⅡB5只与新生隐球菌的DNA杂交,为种特异性克隆;pCNⅢG1只与A、D型新生隐球菌的DNA杂交,为新生变种特异性克隆。应用上述特异性探针可以对隐球菌感染进行早期快速诊断及区分新生变种和格特变种。
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