CircCpsf6在N2a细胞中对细胞活力的抑制作用及其结合的蛋白功能富集分析

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目的 探讨CircCpsf6在N2a细胞中对细胞活力的影响,同时对CircCpsf6结合蛋白进行功能富集分析,预测CircCpsf6影响细胞活力的分子机制.方法 在N2a细胞中转染CircCpsf6的siRNA或过表达质粒,对Circ-Cpsf6进行敲减或过表达,用CCK-8法检测细胞活力.在CircCpsf6的接口处设计特异性探针,进行下拉实验,即CircCpsf6的反义纯化实验.经过磁珠吸附,蛋白的洗脱、纯化,蛋白的质谱检测,得到CircCpsf6可能结合的蛋白.利用在线网站STRING对这些蛋白之间可能存在的相互作用进行预测,同时利用在线网站DAVID进行蛋白功能富集分析.结果 在N2a细胞中,CircCpsf6能够被有效的敲减或过表达(P<0.01),敲减CircCpsf6后,细胞活力上升(P<0.01);过表达CircCpsf6后,细胞活力下降(P<0.05).经过CircCpsf6的反义纯化实验,发现CircCpsf6可能与385个蛋白结合.GO分析和KEGG富集分析提示CircCpsf6可能通过结合蛋白影响细胞的增殖或者凋亡,从而影响细胞活力.结论 CircCpsf6能够抑制N2a细胞的细胞活力.CircCpsf6可能通过结合G6pdx、Pcx、Csl影响细胞增殖,通过结合2210010C04Rik、Try10、Gm2663影响细胞凋亡.
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