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目的 构建重组vp3基因腺病毒pAD-vp3,观察其体内外对人乳腺癌细胞MCF-7的诱导凋亡作用.方法 克隆vp3基因,loxP法同源重组构建重组腺病毒载体pLP-AD-vp3(pAD-vp3),转染293A细胞进行病毒包装,然后NIH3T3细胞测定病毒滴度;将腺病毒感染人乳腺癌细胞MCF-7,蛋白免疫印迹(Western blot)检测Apoptin蛋白表达,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖抑制,48 h后流式细胞仪(FCM)法检测肿瘤细胞的凋亡,并应用表面增强激光解析电离-蛋白质飞行时间质谱仪(SELDI-TOF-MS)检测乳腺癌细胞MCF-7标志蛋白变化.建立乳腺癌细胞MCF-7裸鼠模型,分组给予vp3病毒治疗后测定抑瘤率,实时定量聚合酶链反应技术(real-time PCR)检测vp3基因表达,原位凋亡(TUNEL法)检测肿瘤细胞的凋亡情况,并检测肿瘤组织vp3基因表达.结果 重组腺病毒载体pAD-vp3经鉴定连接正确,转染293A后上清液中病毒滴度可达到3×108 pfu;MTT检测48 h细胞抑制率(62.3%),明显高于正常对照组(P＜0.05),转染48 h后Western blot可见Apoptin蛋白高表达.FCM检测出现凋亡峰,其凋亡百分率高达31.87%.SELDI检测可见2个蛋白质峰M_5480.8+H和M_4967.4+H在两组之间表达量差异有统计学意义(P＜0.05).裸鼠实验可见pAD-vp3组抑瘤率分别为56.82%和69.53%,明显高于空白对照组(t=4.82,P＜0.01),且vp3基因高表达,TUNEL检测可见pAD-vp3组和5-氟脲嘧啶(5-Fu)组细胞核呈棕黄色,低剂量和高剂量组凋亡指数与5-Fu组比较差异无统计学意义(t1=1.25,t2=0.86,均为P＞0.05).结论 成功构建了pAD-vp3腺病毒,vp3基因在体内外均能有效地诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡.