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在现代社会,衰老一直是困扰每个女性的问题。为了延缓衰老,都想尽办法,如去美容院、打美容针、做手术、吃保健品等。其中抗氧化保健品是最常用的手段。抗氧化保健食品之所以有延缓衰老的作用,主要是因为该种保健品对人体内的蛋白质有保护功能。但也恰恰因为这个原因,许多不法商家为盈利,许多产品并没有达到国家生产标准,针对这一情况,对抗氧化保健食品进行检测势在必行。蛋白质羰基含量与人体衰老程度有着直接关系,蛋白质羰基含量越多,表明人体越衰老。所以本次研究将三种抗氧化保健食品喂给老龄小白鼠,然后通过2.4-二硝基苯肼比色法测定白鼠体内的蛋白质羰基含量,建立以蛋白质羰基含量为检测指标的评价抗氧化保健食品质量的方法。
实验材料
实验仪器:上海精科公司生产的型号为HI- 77s的分光光度计;北京时代北利离心机有限公司生产的型号为J GG- 38s离心机。
实验试剂:蛋白酶抑制剂、N- 2-羟乙基哌嗪- 2-乙磺酸、盐酸胍、2.4-二硝基苯肼。
实验动物:昆明种50周龄雌性小鼠4只。本实验所用动物均来自中国医学科学院实验动物所繁育场提供的健康二级昆明种小鼠(动物许可证编号:XCK97089)。
实验方法
首先取1个小白鼠体内组织,然后将其放入5毫升的匀浆缓冲液当中,然后利用J GG-38s离心机对其进行搅碎处理,然后将其放入温室当中10min,等待检测。
然后将另外三只小白鼠分别喂入三种不同的氧化保健食品,经过24小时后,将其杀死,取出体内组织,然后重复上述试验步骤,等待2.4-二硝基苯肼比色法的测定。
实验测定
在上述处理好的白鼠组织中加入3ml2.4-二硝基苯肼的溶液,室温下放置1个小时,之后加入2ml的N- 2- 羟乙基哌嗪- 2-乙磺酸和3ml的蛋白酶抑制剂,再次静置1个小时,然后进行过滤,得到碎组织,加入盐酸胍溶液,并充分震荡,最后用HI- 77s的分光光度计进行吸光度测定,以摩尔消光系数计算蛋白质羰基含量。
结果分析
测定结果如表1所示。
从表1中可以看出,小白鼠在没有喂过抗氧化保健品之前,其蛋白质羰基含量为0.85±0.10 nmol/mg;而喂过抗氧化保健品之后,三只小白鼠的蛋白质羰基含量分别为0.62±0.10 nmol/mg、0.83±0.10 nmol/mg、0.76±0.10 nmol/mg,与之前对比,三只小白鼠的体内的蛋白质羰基含量均有所降低,但是下降的程度有所不同。首先小白鼠2号体内的蛋白质羰基含量下降的最多,说明喂给小白鼠2号的抗氧化保健品功效最好;其次是小白鼠4号,其体内的蛋白质羰基含量下降了0.09±0.10nmol/ mg,说明喂给小白鼠4号的抗氧化保健品存在一定延缓衰老的功效;最后是小白鼠3号,其体内的蛋白质羰基含量较之前没有明显的下降,说明喂给小白鼠3号的抗氧化保健品几乎没有什么功效,质量完全不过关。
综上所述,抗氧化保健食品是当前主要的抗衰老产品之一。因其具有巨大市场潜力,市面上的抗氧化保健食品的质量参差不齐,所以必须对其进行质量检測。本次研究将蛋白质羰基含量作为衡量标准,通过2.4-二硝基苯肼比色法测定白鼠体内的蛋白质羰基含量变化情况,以此来判断产品的功效。
实验材料
实验仪器:上海精科公司生产的型号为HI- 77s的分光光度计;北京时代北利离心机有限公司生产的型号为J GG- 38s离心机。
实验试剂:蛋白酶抑制剂、N- 2-羟乙基哌嗪- 2-乙磺酸、盐酸胍、2.4-二硝基苯肼。
实验动物:昆明种50周龄雌性小鼠4只。本实验所用动物均来自中国医学科学院实验动物所繁育场提供的健康二级昆明种小鼠(动物许可证编号:XCK97089)。
实验方法
首先取1个小白鼠体内组织,然后将其放入5毫升的匀浆缓冲液当中,然后利用J GG-38s离心机对其进行搅碎处理,然后将其放入温室当中10min,等待检测。
然后将另外三只小白鼠分别喂入三种不同的氧化保健食品,经过24小时后,将其杀死,取出体内组织,然后重复上述试验步骤,等待2.4-二硝基苯肼比色法的测定。
实验测定
在上述处理好的白鼠组织中加入3ml2.4-二硝基苯肼的溶液,室温下放置1个小时,之后加入2ml的N- 2- 羟乙基哌嗪- 2-乙磺酸和3ml的蛋白酶抑制剂,再次静置1个小时,然后进行过滤,得到碎组织,加入盐酸胍溶液,并充分震荡,最后用HI- 77s的分光光度计进行吸光度测定,以摩尔消光系数计算蛋白质羰基含量。
结果分析
测定结果如表1所示。
从表1中可以看出,小白鼠在没有喂过抗氧化保健品之前,其蛋白质羰基含量为0.85±0.10 nmol/mg;而喂过抗氧化保健品之后,三只小白鼠的蛋白质羰基含量分别为0.62±0.10 nmol/mg、0.83±0.10 nmol/mg、0.76±0.10 nmol/mg,与之前对比,三只小白鼠的体内的蛋白质羰基含量均有所降低,但是下降的程度有所不同。首先小白鼠2号体内的蛋白质羰基含量下降的最多,说明喂给小白鼠2号的抗氧化保健品功效最好;其次是小白鼠4号,其体内的蛋白质羰基含量下降了0.09±0.10nmol/ mg,说明喂给小白鼠4号的抗氧化保健品存在一定延缓衰老的功效;最后是小白鼠3号,其体内的蛋白质羰基含量较之前没有明显的下降,说明喂给小白鼠3号的抗氧化保健品几乎没有什么功效,质量完全不过关。
综上所述,抗氧化保健食品是当前主要的抗衰老产品之一。因其具有巨大市场潜力,市面上的抗氧化保健食品的质量参差不齐,所以必须对其进行质量检測。本次研究将蛋白质羰基含量作为衡量标准,通过2.4-二硝基苯肼比色法测定白鼠体内的蛋白质羰基含量变化情况,以此来判断产品的功效。