【摘 要】
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目的:克隆小鼠B7-H4(mB7-H4)基因cDNA全长, 构建表达跨膜型mB7-H4-GFP融合蛋白的真核表达载体pmB7-H4-GFP和表达可溶性mB7-H4-Fc融合蛋白的真核表达载体pmB7-H4-Fc.方法:采用
【机 构】
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广东医学院临床免疫学教研室,华中科技大学同济医学院免疫学系
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目的:克隆小鼠B7-H4(mB7-H4)基因cDNA全长, 构建表达跨膜型mB7-H4-GFP融合蛋白的真核表达载体pmB7-H4-GFP和表达可溶性mB7-H4-Fc融合蛋白的真核表达载体pmB7-H4-Fc.方法:采用RT-PCR技术从小鼠脾细胞总RNA中逆转录mB7-H4 cDNA, 将其全长cDNA去掉中止密码克隆入真核表达载体pEGFP-N1中, 并转染293T细胞使其表达跨膜型mB7-H4-GFP融合蛋白;将其胞外功能区cDNA克隆入pcDNA3.1-hFc真核表达载体中, 并转染COS-7细胞使其表达可溶性mB7-H4-Fc融合蛋白.结果:序列测定证实克隆的mB7-H4全长cDNA 阅读框正确完整,酶切和序列测定证实mB7-H4分别正确插入pEGFP-N1和pcDNA3.1-hFc载体中, 两种表达载体分别转染293T细胞和COS-7细胞后可分别表达跨膜型mB7-H4-GFP和可溶性mB7-H4-Fc.结论:成功地克隆mB7-H4基因并构建了两个真核表达载体, 它们可分别表达跨膜型和可溶性融合蛋白.
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