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研究驱动蛋白Eg5在神经母细胞瘤中表达及其靶向抑制剂S-三苯甲基-L-半胱氨酸(S-Trityl-L-Cysteine,STLC)对神经母细胞瘤的诱导作用。
方法通过免疫荧光及Western-blot检测Eg5蛋白在神经母细胞瘤中的表达水平,通过相差显微镜观察STLC对细胞形态学的影响,采用CCK-8法、流式细胞术检测STLC对细胞增值、凋亡及周期的影响,采用FISH法检测STLC对原癌基因MYCN扩增的影响,并经DAPI细胞核染色实验观察STLC对细胞核形态变化的影响。
结果免疫荧光及Western-blot结果显示Eg5蛋白在神经母细胞瘤中稳定表达。细胞形态学观察结果表明,细胞经不同浓度的STLC诱导,当浓度≥5 μmol/L,诱导时间为72 h时,细胞形态变圆,出现大量凋亡样小体。CCK-8细胞增殖能力检测及流式细胞术分析结果显示,STLC具有促进细胞凋亡,抑制细胞分裂与增殖的作用,将细胞周期阻滞在G2/M期,且其诱导作用呈时间剂量依赖性。FISH实验证实STLC对MYCN基因扩增无影响。
结论神经母细胞瘤组织及细胞株中均表达Eg5蛋白,STLC通过抑制Eg5,影响神经母细胞瘤细胞的分裂及增值,从而促进细胞凋亡。结果表明Eg5有望作为神经母细胞瘤分子治疗的靶点。