【摘 要】
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目的建立一个详细、易于重复的人脐静脉内皮细胞原代培养操作流程。方法采用胶原酶消化法分离人脐静脉内皮细胞;用倒置显微镜观察细胞形态,免疫荧光法检测内皮细胞标志分子,W
【机 构】
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重庆医科大学生命科学研究院,重庆医科大学第一附属医院心内科
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目的建立一个详细、易于重复的人脐静脉内皮细胞原代培养操作流程。方法采用胶原酶消化法分离人脐静脉内皮细胞;用倒置显微镜观察细胞形态,免疫荧光法检测内皮细胞标志分子,Western blotting检测内皮细胞标志酶——一氧化氮合酶的含量。结果 0.2%胶原酶Ⅰ在37℃条件下消化5~13 min可得到高纯度(95%)人脐静脉内皮细胞;在倒置显微镜下,人脐静脉内皮细胞呈典型的鹅卵石样,细胞核明显;Ⅷ因子和CD31的免疫荧光检测呈阳性;Western blotting结果显示,分离到的人脐静脉内皮细胞中有一氧化氮合酶持续合成。结论建立的人脐静脉内皮细胞原代培养和鉴定的操作流程简单易学,且在形态、标志分子和关键性标志酶3个方面提供细胞鉴定的方法和参考数据。
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