【摘 要】
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目的:确定一个种特异性的实时聚合酶链反应(PCR)法检测绿脓杆菌(PA),一个可能提供给其他细菌病原体通用目标的用于PA的次一级目标DNA,并验证这种用于诊断测试的检测方法.方法
【机 构】
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美国宾夕法尼亚州匹兹堡大学医学院,眼科及视觉科学研究中心,UPMC眼科中心,The Charles T.Campbell.眼科微生物学实验室
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目的:确定一个种特异性的实时聚合酶链反应(PCR)法检测绿脓杆菌(PA),一个可能提供给其他细菌病原体通用目标的用于PA的次一级目标DNA,并验证这种用于诊断测试的检测方法.方法:利用已知PA的角膜炎株建立对ecfX PA基因和16S rRNA基因的PCR检测.两个实验的结果参数是“检测限”(LOD),扩增效率(AE)和聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)扩增产物分析.两种检测方法通过对20例PA DNA阳性的真阳性临床标本和20例不含有PA DNA的真阴性样品的检测进行了验证.描述性统计和PAGE分析用作为结果参数.结果:通过ecfX检测的AE为96.6%,而LOD为每微升33.6目标DNA拷贝.16S rRNA检测的AE为103.4%,而LOD为每微升8.12拷贝.ecfX和16S rRNA 检测的敏感性,特异性,阳性预测值,阴性预测值,效率分别为(75%,95%,94%,79%和85%),及(70%,100%,100%,77%和85%).这两种PCR方法经过了验证,通过了PAGE分析的DNA图谱确认.结论:这里描述的PCR方法可能是对PA角膜炎标准诊断方法的一种有用的辅助检测.
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