背景肝癌的发病率和死亡率逐年攀升，对肝癌发生发展机制的研究尤为重要。目的 应用CRISPR/Cas9技术在人肝癌HepG2细胞中敲除组蛋白去乙酰酶6（histone deacetylase 6,HDAC6）基因，构建HDAC6基因敲除的HepG2稳定表达细胞系，并检测其对人肝癌细胞生长的影响。方法 根据CRISPR/Cas9技术靶点设计原则设计特异性识别HDAC6基因的单向导RNA（single guide RNA,sgRNA）序列，构建LentiCRISPR-HDAC6-sgRNA真核重组表达质粒，测序鉴定后包装慢病毒感染HepG2细胞，用嘌呤霉素（puromycin）抗性筛选得到敲除HDAC6基因稳定表达的细胞系，Western blot鉴定HDAC6基因的敲除效果，CCK-8生长曲线实验检测HDAC6基因敲除对细胞增殖能力的影响，划痕实验和Transwell迁移实验检测HDAC6基因敲除对细胞迁移能力的影响。Western blot鉴定HDAC6基因敲除对调节α-tubulin乙酰化的影响，细胞存活曲线实验检测HDAC6基因敲除后HepG2对HDAC6抑制剂ACY-1215的敏感度，采用流式细胞术检测HDAC6基因敲除对HepG2细胞周期分布和凋亡的影响。结果 成功构建HDAC6基因敲除的HepG2稳定表达细胞系后，经实验证明HDAC6基因敲除能够显著抑制HepG2细胞的增殖和迁移，使α-tubulin的乙酰化表达增强且能降低HepG2对ACY-1215的敏感度，还能使HepG2细胞发生G1期阻滞，促进HepG2细胞的凋亡。结论 敲除HDAC6基因可以抑制HepG2细胞增殖和迁移，使α-tubulin乙酰化程度增加，调节HepG2细胞对ACY-1215的敏感度，且影响HepG2细胞的周期和凋亡，为进一步研究HDAC6在肝癌中的功能机制奠定了基础。