【摘 要】
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目的:以小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7为研究对象,体外探讨高糖微环境对小鼠巨噬细胞极化的影响,并阐明miR-125b的调控作用。方法:RAW264.7细胞分为正常对照（NG）组、正糖抑制（NG+miR-125b inhibitor）组、高糖刺激（HG）组和高糖抑制（HG+miR-125b inhibitor）组,进行相应的干预处理。各组细胞体外培养72 h后留取细胞及上清,采用实时荧光定量PC
【基金项目】
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国家自然科学基金青年基金项目（81600655）； 北京市科技局自然科学基金青年基金项目（7214253）； 解放军总医院二中心保健课题项目（NLBJ-2019006,ZXBJ2001）；
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目的:以小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7为研究对象,体外探讨高糖微环境对小鼠巨噬细胞极化的影响,并阐明miR-125b的调控作用。方法:RAW264.7细胞分为正常对照（NG）组、正糖抑制（NG+miR-125b inhibitor）组、高糖刺激（HG）组和高糖抑制（HG+miR-125b inhibitor）组,进行相应的干预处理。各组细胞体外培养72 h后留取细胞及上清,采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测各组细胞中M1/M2极化相关因子mRNA和miR-125b表达水平,酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测各组细胞上清中M1/M2极化相关细胞因子水平,流式细胞术检测M1/M2极化表面标记物CD86 （M1标记）和CD206 （M2标记）阳性表达率。通过miR-125b inhibitor沉默细胞中miR-125b的表达,进一步采用RT-qPCR和Western blotting法检测各组细胞中M1/M2极化相关因子干扰素调节因子4 （IRF4）、干扰素调节因子5 （IRF5）和过氧化物酶体增殖物激活受体（PPAR）mRNA及蛋白水平表达。结果:高糖处理72 h后,与NG组比较,HG组细胞中白细胞介素10（IL-10）mRNA表达水平和细胞上清中IL-10水平明显降低（P＜0.01）,白细胞介素1β （IL-1β）和Toll样受体4 （TLR4） mRNA表达水平明显升高（P＜0.01）,细胞上清中IL-1β、IL-12和IL-6水平明显升高（P＜0.01）。与NG组比较,HG组细胞中CD86阳性表达率明显升高（P＜0.05）,CD206阳性表达率明显降低（P＜0.05）, miR-125b表达水平明显升高（P＜0.01）。采用miR-125b inhibitor沉默miR-125b表达后,分别与NG和HG组比较,NG+miR-125b inhibitor组和HG+miR-125b inhibitor组细胞中miR-125b表达水平均明显降低（P＜0.01）,细胞中IL-10 mRNA表达水平和细胞上清中IL-10水平升高（P＜0.01）,细胞中IL-1β和TLR4 mRNA表达水平及细胞上清中IL-12、IL-6和IL-1β水平均明显降低（P＜0.05或P＜0.01）,细胞中CD86阳性表达率降低（P＜0.05或P＜0.01）,CD206阳性表达率升高（P＜0.01）。与NG组比较,HG组细胞中IRF4和PPAR mRNA和蛋白表达水平均明显降低（P＜0.01）,IRF5 mRNA和蛋白表达水平均明显升高（P＜0.01）;沉默miR-125b表达后,与NG组比较,NG+miR-125b inhibitor组细胞中IRF4和PPAR mRNA及蛋白表达水平均明显升高（P＜0.01）,IRF5 mRNA和蛋白表达水平明显降低（P＜0.05）;与HG组比较,HG+miR-125b inhibitor组细胞中IR4和PPAR mRNA及蛋白水平明显降低（P＜0.01）,IRF5 mRNA表达水平明显降低（P＜0.01）。结论:高糖刺激可以诱导巨噬细胞向促炎M1表型极化,同时miR-125b表达水平明显升高,沉默miR-125b表达可部分逆转高糖刺激诱导的巨噬细胞向促炎M1表型的极化,该过程可能是通过上调IRF4和PPAR及下调IRF5实现的。
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