初步探讨人未成熟睾丸组织在体外培养条件下其生殖细胞发育情况。
方法截取睾丸肿瘤术中的瘤旁睾丸组织进行体外培养,分别培养4~17周后苏木素伊红(HE)染色观察培养睾丸组织的组织学结构,测量曲细精管横截面积和直径,RT-PCR检测Piwil2基因在培养组织中的表达,免疫组化检测Piwil2蛋白在生殖细胞中的表达。
结果人睾丸组织培养初期(4周)曲细精管横截面积和直径逐渐增大,培养后期有减小趋势,1岁时取材的睾丸组织曲细精管直径在培养前、培养4周、培养8周分别为(38.08±4.67) μm、(56.65±8.71) μm、(52.58±6.43) μm;2.9岁时取材的直径相应时间点分别为(38.40±2.33) μm、(56.81±7.71) μm、(54.15±5.44) μm;8.5岁时取材的直径相应时间点分别为(49.97±4.94) μm、(58.78±2.74) μm、(53.40±5.04) μm。1岁时取材的睾丸组织曲细精管横截面积在培养前、培养4周、培养8周分别为(1150.52±150.94) μm2、(2579.68±842.91) μm2、(2203.97±549.04) μm2;2.9岁时取材的横截面积相应时间点分别为(1162.30±143.57) μm2、(2581.21±700.53) μm2、(2326.26±468.48) μm2;8.5岁时取材的横截面积相应时间点分别为(1979.91±386.05) μm2、(2719.61±246.98) μm2、(2259.42±433.24) μm2。培养8周后曲细精管中观察到类初级精母细胞,Piwil2免疫组化染色提示生殖细胞具有更新分化能力。
结论在体外培养条件下人未成熟睾丸组织中精原细胞可发育成精母细胞。培养8周生殖细胞仍然具有自我更新和分化能力,之后生殖细胞发育逐渐衰退。