【摘 要】
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目的:克隆甲型副伤寒沙门菌1相鞭毛蛋白抗原(H1抗原)fliC-a基因,构建原核表达系统并鉴定重组蛋白的抗原性。方法:PCR方法扩增fliC-a基因,克隆到质粒pET-42a构建原核表达载体p
【机 构】
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浙江医学高等专科学校,浙江省疾病预防控制中心,浙江大学附属第二医院,
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目的:克隆甲型副伤寒沙门菌1相鞭毛蛋白抗原(H1抗原)fliC-a基因,构建原核表达系统并鉴定重组蛋白的抗原性。方法:PCR方法扩增fliC-a基因,克隆到质粒pET-42a构建原核表达载体pET-fliC-a,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导目的重组蛋白rfliC-a表达,用SDS-PAGE鉴定rfliC-a,Western blot和双向免疫扩散法鉴定rfliC-a的抗原性和免疫原性。结果:成功表达并纯化获得相对分子量为14.4 kDa的重组蛋白rfliC-a,rfliC-a能与兔抗甲型副伤寒沙门菌全菌血清发生特异性结合,免疫家兔获得高效价抗体。结论:成功构建了fliC-a基因原核表达系统,所表达的rfliC-a具有良好的抗原性。
OBJECTIVE: To clone fliC-a gene of Salmonella paratyphi A phase flagellin antigen (H1 antigen), construct a prokaryotic expression system and identify the antigenicity of the recombinant protein. Methods: The fliC-a gene was amplified by PCR and cloned into plasmid pET-42a. The prokaryotic expression vector pET-fliC-a was constructed and transformed into E.coli BL21 (DE3). IPTG induced the expression of recombinant protein rfliC- Identification of rfliC-a, Western blot and two-way immunodiffusion identified rfliC-a antigenicity and immunogenicity. Results: The recombinant protein rfliC-a with a relative molecular mass of 14.4 kDa was successfully expressed and purified. RfliC-a could specifically bind to the whole serum of S. paratyphi A and give high titer antibody. Conclusion: The prokaryotic expression system of fliC-a gene was successfully constructed, and the expressed rfliC-a has good antigenicity.
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