【摘 要】
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目的 研究慢性肾衰竭(CRF)大鼠血清对主动脉平滑肌细胞内质网应激(ERS)和激活转录因子4(ATF4)的活化情况,探讨CRF血清对主动脉平滑肌细胞作用的可能机制.方法 建立CRF大鼠模型,采集其血清.采用原代培养的大鼠主动脉平滑肌细胞,用不同浓度的CRF(10%和20%)血清刺激24 h,免疫荧光法观察ATF4核转位;Western印迹法检测CRF血清对平滑肌细胞糖调节蛋白78(GRP78)、P
【机 构】
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400037重庆,第三军医大学新桥医院肾内科全军肾脏病中心重庆市肾病研究所,400037重庆,第三军医大学新桥医院肾内科全军肾脏病中心重庆市肾病研究所,400037重庆,第三军医大学新桥医院肾内科全军
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目的 研究慢性肾衰竭(CRF)大鼠血清对主动脉平滑肌细胞内质网应激(ERS)和激活转录因子4(ATF4)的活化情况,探讨CRF血清对主动脉平滑肌细胞作用的可能机制.方法 建立CRF大鼠模型,采集其血清.采用原代培养的大鼠主动脉平滑肌细胞,用不同浓度的CRF(10%和20%)血清刺激24 h,免疫荧光法观察ATF4核转位;Western印迹法检测CRF血清对平滑肌细胞糖调节蛋白78(GRP78)、P-PERK(pancreatic ER kinase)和ATF4蛋白表达的影响;凝胶电泳迁移率改变法(EMSA)检测ATF4的DNA结合活性.结果 (1)CRF血清能明显上调平滑肌细胞GRP78蛋白表达,与对照组差异有统计学意义(P<0.01),高浓度CRF血清作用更为明显.(2)20%CRF血清与主动脉平滑肌细胞孵育24 h后,免疫荧光检查发现ATF4发生了核转位.(3)CRF 血清刺激后,主动脉平滑肌细胞p-PERK、ATF4蛋白表达均显著高于对照组,差异有统计学意义(均P<0.01),高浓度更为明显.(4)CRF血清刺激后,主动脉平滑肌细胞ATF4 DNA结合活性显著上调,与对照组差异有统计学意义(P<0.01).结论 CRF大鼠血清可诱发平滑肌细胞发生ERS,同时活化了PERK-ATF4信号通路。
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