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目的：构建一种更接近于人体肿瘤微环境的三维肿瘤细胞培养模型---双层细胞球，并运用此模型观察结肠癌细胞-成纤维细胞相互作用对缝隙连接蛋白Cx43表达的影响；验证该模型，分析其优势，同时明确两种细胞间是否存在相互作用，并探讨此相互作用对结直肠癌发生发展的影响。方法借助小组特制装置，将结肠癌细胞SW620和成纤维细胞HELF共培养成双层细胞球，通过免疫细胞化学法检测Cx43的表达。利用免疫细胞化学法和免疫荧光技术检测结肠癌细胞单独培养、结肠癌细胞-成纤维细胞双层共培养及直接混合共培养三组中Cx43的表达差异。应用免疫组织化学法检测结直肠癌组织中Cx43的表达情况。结果细胞球中细胞形态良好，两种细胞分界明显；在两种细胞分界处发现了Cx43表达明显上调；SW620细胞单独培养时不表达Cx43，双层共培养时仅有微弱表达，直接混合共培养时表达明显增强；结直肠癌组织的肿瘤实体内部Cx43表达较弱，侵袭前缘表达增强。结论双层细胞球是模拟体内肿瘤微环境中细胞间相互作用的一种直观而敏感的模型。该模型有助于再现结肠癌细胞与成纤维细胞相互作用上调Cx43表达的现象。