【摘 要】
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试验旨在探究S100A12在胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)诱导猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophages,PAM)炎性细胞因子表达及吞噬中的作用.PAM细胞接种APP菌株后,用实时荧光定量PCR检测感染后不同时间点炎性细胞因子和S100A12的mRNA表达水平;构建S100A12重组蛋白表达载体并进行重组蛋白的表达纯化,用MTT法检测其对PAM的细胞毒性,实时荧光定量PCR检测不同浓度(0、5、50和500 ng/m
【机 构】
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西北民族大学生命科学与工程学院,兰州730030;吉林大学动物医学学院,长春130000;西北民族大学生命科学与工程学院,兰州730030;吉林大学动物医学学院,长春130000
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试验旨在探究S100A12在胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)诱导猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophages,PAM)炎性细胞因子表达及吞噬中的作用.PAM细胞接种APP菌株后,用实时荧光定量PCR检测感染后不同时间点炎性细胞因子和S100A12的mRNA表达水平;构建S100A12重组蛋白表达载体并进行重组蛋白的表达纯化,用MTT法检测其对PAM的细胞毒性,实时荧光定量PCR检测不同浓度(0、5、50和500 ng/mL) S100A12重组蛋白对PAM炎性细胞因子mRNA表达水平的影响;构建S100A12干扰质粒,用Western blotting、实时荧光定量PCR及流式细胞术检测其干扰效率及其对APP感染PAM后炎性细胞因子mRNA表达水平和细胞凋亡的影响;用平板计数法检测S100A12表达对APP的黏附侵袭及其在PAM细胞内存活的影响.结果 表明,APP感染促进PAM中IL-6、IL-8、IL-18、IL-1β和TNF-α等炎性细胞因子表达的同时也促进S100A12的表达,且该表达随APP感染剂量增大及时间的延长均显著或极显著增加(P＜0.05;P＜0.01).5、50和500 ng/mL重组蛋白S100A12对PAM均没有毒性.5和50 ng/mL的重组蛋白S100A12均可显著促进PAM中IL-6、IL-8、TNF-α、IL-1β、IL-21和IL-5等炎性细胞因子的表达(P＜0.05),而高浓度的S100A12重组蛋白则对上述炎性细胞因子表达无影响(P＞0.05).干扰质粒可成功阻断S100A12蛋白的表达,与转染shNC的对照组相比,在APP诱导下转染shS100A12干扰质粒的PAM中细胞因子IL-6、IL-8、IL-1β和IL-5的转录水平显著或极显著降低,且细胞凋亡率也显著或极显著增加(P＜0.05;P＜0.01).进一步研究发现,干扰PAM中S100A12蛋白的表达可显著增强APP对PAM的黏附侵袭能力及其在PAM内的存活能力(P＜0.05),相反,体外添加S100A12重组蛋白则显著抑制APP对PAM细胞的黏附侵袭及其在PAM内的存活(P＜0.05).以上研究表明,S100A12具有增强APP感染后PAM炎性细胞因子的表达、抑制APP诱导的PAM凋亡和降低APP对PAM的黏附侵袭及其在PAM内存活的作用,为进一步揭示APP感染过程中S100A12对PAM调控作用及机制奠定了基础.
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