目的 研究四环素调控表达的肿瘤坏死因子α（TNFα）抑制HBV复制的作用。方法以pcDNA4TM／四环素操纵子序列（TO）载体为模板，用PeR法扩增含四环素调控表达序列片段TO，插入pUC118载体中测序，选择测序正确的序列取代pVITR03载体中相应的片段，构建成pVITR03-TO。用相同的方法以pcDNA6／四环素阻遏蛋白（TR）。载体为模板扩增TR基因，经测序证实后插入pVITR03-TO载体的一个多克隆位点，构建成pVITR03-TO-TR。在另一个多克隆位点插入TNFα基因，构建pVITR03-TO-T10TNFα。将重组质粒瞬时转染HepG2细胞，研究四环素调控表达TNF0t的有效性。以HepG2．2．15细胞为HBV复制模型，转染pVITR03-TO-TR-TNFα后，经潮霉素抗性筛选及有限稀释，选择高效表达TNFα的细胞建立细胞系，观察经四环素调控表达后，TNFα抑制HBV复制的作用。多组间数据比较使用方差分析。结果经过改建的双表达载体能够有效表达TNFα，并可以用不同剂量的四环素进行调控，四环素的最佳工作浓度为1．0μg／ml。诱导l、3、5d后，转染pVITR03-TOTR-TNFα组上清液中的HBsAg抑制率分别为14．8％、11．5％、28．44％，转染pVITR03-TOTR组分别为1．2％、1．1％、0，诱导5d后的HBsAg抑制率差异有统计学意义（F=13．65，P〈0．05）I转染pVITR03-TOTR-TNFa组的HBeAg的抑制率分别为50％、26．67％、47．85％，转染pVITR03-TOTR组分别为0．3％、1．3％、0，诱导1、3、5d时的HBeAg抑制率差异均有统计学意义（F值分别为27．31、14．06和43．76，P值均〈O．05）。荧光定量PCR结果显示，诱导5d后，TNFα对细胞内和培养上清液的HBVDNA有明显的抑制作用，抑制率分别为70．26％和79．86％，与对照组相比，差异均有统计学意义∽值分别为96．7和62．72，P〈0．05）。进一步的研究结果表明，TNFα对HBVS基因的mRNA转录有明显抑制作用。结论成功构建了四环素调控表达的TNFα载体，瞬时和稳定转染细胞后均能有效表达。在细胞模型中对HBVDNA的抑制作用最好，其次是对HBeAg的抑制，对HBsAg的抑制作用最弱。TNFα对病毒转录水平的抑制可能是其发挥抗HBV作用的一个重要环节。