快捷的定点突变效率近100%的大引物PCR方法(英文)

来源 :生物化学与生物物理进展 | 被引量 : 0次 | 上传用户:guoqy
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
报道了一种新的PCR突变方法,它不需要纯化大引物或设计特别的旁侧引物.利用一个诱变引物和两个测序引物(Tm≤58℃)作为旁侧引物.第一轮PCR产物12.5μl直接加入到50μl的第二轮PCR反应体系作为模板和大引物,在开始第二轮PCR反应时,增加在68℃退火温度下进行10个循环的不对称PCR,这一步骤大大提高了通过600bp或800bp大引物所导致的突变效率.结果表明,该方法的产物能够达到高保真、97%~98%的突变效率和高产率.
其他文献
利用细胞核移植技术将NIH3T3细胞核和孤雌桑椹胚单个卵裂球,分别移植到去核MⅡ期受体卵母细胞中,通过免疫荧光染色后比较体外受精胚、孤雌胚、NIH3T3核移植重组胚和孤雌桑椹胚
早期儿童教育存在过早、过多、过高、片面的倾向。究其原因.父母教育观念出现偏差及不正确的教育方式、幼儿园盲目迎合家长的需要、传统考试制度的束缚是主要推力,而社会媒体的
高校图书馆是高校中为广大师生员工提供知识、传递信息和交流学术的场所,而图书馆内的期刊服务是图书馆内最重要的服务内容之一。本文首先论述了目前高校图书馆期刊服务的现
针对目前大学生艰苦奋斗意识淡薄、高校教育效果不佳的现状,本文从调查情况入手,分析了艰苦奋斗意识淡薄的原因,主要阐述了加强大学生艰苦奋斗教育的有效途径。
2006年10月30日,在这金秋重阳之日,迎来了我国著名生物化学家杨福愉院士八十华诞.由中国科学院生物物理研究所主办的生物膜研究前沿学术研讨会暨庆贺杨福愉院士八十华诞座谈会在
小鼠胰泡细胞表达和分泌一种被称为胰甘油三脂酶(PTL)的脂肪酶,主要参与食物来源的甘油三脂的消化吸收,胰泡细胞同时也表达胰脂肪酶相关蛋白1(PLRP1),它同PTL具有很高的同源性.为了研
报道了以二聚体存在的dimo-BmK M1的1.4A分辨率晶体结构.蛋白质中的肽键是局部双键,不可旋转,因此具有顺式(cis)和反式(trans)两种构型,它们不能通过旋转操作相互转换.非脯氨酸顺式肽键
髓鞘来源的中枢神经再生抑制因子——Nogo-A被发现除表达于成熟的少突胶质细胞,还广泛高表达于多种类型的神经元中.目前,神经元中Nogo-A的功能还不明确.为探讨神经元内Nogo-A的功
甲状腺功能与碘摄入水平有密切的关系,甲状腺功能主要是通过其合成的甲状腺激素来实现的.脱碘反应是调节甲状腺激素生物活性的重要方式,不同碘营养状态下甲状腺组织Ⅰ型脱碘
以THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞为研究对象,观察载脂蛋白A-Ⅰ与三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ATP binding cassette transporter A1,ABCA1)的相互作用,并探讨它们相互作用的机制,以