【摘 要】
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目的 观察1α,25-二羟维生素DB3B [1α,25-(OH)B2BDB3B]对HepG2细胞中细胞色素P450酶同工酶3A4(CYP3A4)的诱导特点,为药物代谢研究建立简便高效的细胞模型提供依据.方法 选取
【机 构】
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南京医科大学第一附属医院感染病科,上海
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目的 观察1α,25-二羟维生素DB3B [1α,25-(OH)B2BDB3B]对HepG2细胞中细胞色素P450酶同工酶3A4(CYP3A4)的诱导特点,为药物代谢研究建立简便高效的细胞模型提供依据.方法 选取3个浓度的1α,25-(OH)B2BDB3B(0.10、0.25、0.35 μmol/L)加入HepG2细胞中,分别在培养24、48、72、96 h时,以四甲基偶氮唑盐法观察细胞活性,RT-PCR法检测CYP3A4 mRNA的表达,Western blot检测CYP3A4蛋白的表达.结果 3个浓度的1α,25-(OH)B2BDB3B对HepG2细胞无毒性作用.未经1α,25-(OH)B2BDB3B诱导的HepG2细胞CYP3A4 mRNA的表达很低,3个浓度的1α,25-(OH)B2BDB3B在诱导的第24小时未见到CYP3A4 mRNA表达增高;在48 h,3个处理组的CYP3A4 mRNA表达量分别是对照组的120%、134%、200%;72 h达174%、254%、420%;96 h为258%、450%、370%.未经诱导的HepG2细胞CYP3A4蛋白的表达很低,在3个浓度下,诱导后的第24小时未见到CYP3A4蛋白表达的增高;在48 h,0.10 μmol/L组未观察到诱导表达增加,0.25 μmol/L组和0.35 μmol/L组诱导倍数分别为1.2和2.2;72 h各浓度处理组诱导倍数分别达1.8、3.4和6.5;96 h分别为4.1、6.1、7.2.结论 1α,25-(OH)B2BDB3B可以较好的诱导HepG2细胞中CYP3A4在转录水平和蛋白质表达水平的表达,可应用于CYP3A4酶被抑制导致的药源性肝损害或其他毒性和不良反应的研究.
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