shRNA靶向沉默ST8SIA4基因表达对乳腺癌细胞侵袭和迁移的影响

来源 :临床肿瘤学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:charles_y_tang
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目的探讨短发夹RNA(shRNA)靶向沉默α2,8-唾液酸转移酶4(ST8SIA4)表达对乳腺癌BT549细胞侵袭、迁移的影响。方法采用实时荧光定量PCR(QPCR)和Western blotting检测乳腺癌BT549细胞和乳腺正常上皮MCF-10A细胞中ST8SIA4 mRNA和蛋白水平。采用LipofectamineTM2000向BT549细胞随机转染成功构建的靶向沉默ST8SIA4表达的shRNA载体片段(沉默组)或无义shRNA片段(对照组),转染48 h后采用QPCR检测ST8SIA4 mRNA水平,Western blotting检测ST8SIA4、磷酸化丝/苏氨酸蛋白激酶(p-Akt)、神经纤毛蛋白2(NRP2)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达情况,Transwell实验和划痕实验分别检测细胞的侵袭和迁移能力。结果与MCF-10A细胞相比,BT549细胞的ST8SIA4 mRNA和蛋白水平均升高(P<0. 05)。转染48 h后,沉默组的ST8SIA4 mRNA和蛋白水平分别为0. 19±0. 02和0. 13±0. 02,均低于对照组的0. 98±0. 11和0. 52±0. 05(P<0. 05);沉默组的侵袭细胞数、迁移率及p-Akt、NRP2和TNF-α蛋白相对表达量分别为(39. 5±4. 2)个、(16. 9±1. 3)%、0. 22±0. 03、0. 31±0. 04和0. 27±0. 06,均低于对照组的(91. 3±8. 5)个、(38. 4±3. 9)%、0. 58±0. 07、0. 55±0. 05和0. 46±0. 05,差异有统计学意义(P<0. 05)。结论 ST8SIA4基因在乳腺癌BT549细胞中高表达,沉默其表达可抑制侵袭和迁移过程,可能与上调p-Akt、NRP2和TNF-α蛋白表达有关。
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